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基因文庫(kù)中，連接轉(zhuǎn)化問(wèn)題
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大家好：我最近在做基因文庫(kù)的連接轉(zhuǎn)化。但是發(fā)現(xiàn)一個(gè)問(wèn)題，希望大家能幫幫忙，解釋一下。 連接時(shí)我做了三組：1、未去磷酸化載體，T4酶，buffer。 2、去磷酸化載體+DNA不完全酶切片段（Sau3A）,buffer,T4酶。 3、去磷酸化載體，T4酶，buffer 結(jié)果是：1、密密麻麻長(zhǎng)了一板子，全是藍(lán)斑 2、很稀疏長(zhǎng)了一板，少部分藍(lán)斑。 3、也長(zhǎng)了一板，但是比2中的多，藍(lán)斑較多。 我認(rèn)為在這個(gè)對(duì)比試驗(yàn)中，3上的板子應(yīng)該不長(zhǎng)，或者長(zhǎng)的很少很少 。因?yàn)槭侨チ姿峄目蛰d體，如果不發(fā)生自連，應(yīng)該吧、會(huì)不長(zhǎng)。但是居然比2中的長(zhǎng)的還多。 還有一個(gè)問(wèn)題，上學(xué)期我也做了一次文庫(kù)的轉(zhuǎn)化，去磷酸化載體+DNA不完全酶切片段轉(zhuǎn)化后，長(zhǎng)的菌很多，但是這學(xué)期做的明顯菌長(zhǎng)的很少。（DNA片段用的是上學(xué)期12月份酶切的.會(huì)不會(huì)有影響） |
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gyesang: 金幣+1, 鼓勵(lì)應(yīng)助！ 2013-04-04 13:31:24
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- 附件 2 : （2011）Circularpolymeraseextensioncloningforhigh-throughputcloningofcomplexandcombinatorialDNAlibraries.pdf
2013-04-04 11:25:25, 242.4 K
2013-04-04 11:25:35, 908.39 K
2樓2013-04-04 11:26:05
3樓2013-04-04 11:47:36
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