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zjuwrx銀蟲 (小有名氣)
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[交流]
雙酶切，連接，轉(zhuǎn)化問題 已有16人參與
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最近做轉(zhuǎn)化，結(jié)果很郁悶，跟各位交流一下 我用的載體是一個(gè)1300改造后的載體，別人給的，卡那抗性。自己的片段1500bp，是從另一個(gè)載體上酶切得到，兩端的酶切位點(diǎn)分別是EcoR l 和 Hind lll ，1300載體也用EcoR l 和 Hind lll 酶切后，回收大片段，用Takara 的T4 連接酶 16°C 反應(yīng)過夜；轉(zhuǎn)化涂板。 現(xiàn)在問題來了，涂平板長的菌都是一片一片的，很難有單菌落。圖中是我用了10微升的菌液涂卡那板，結(jié)果長成這個(gè)樣子。我之前做轉(zhuǎn)化從來沒有碰到過這種情況，各位蟲子有沒有什么好的建議？此外，我挑出幾個(gè)菌斑搖菌，加了卡那抗生素，抽質(zhì)粒后，再進(jìn)行雙酶切，怎么都得不得2條帶，也就是沒有我的目的片段，實(shí)在是不明白了，連接不成功還能長這么多的菌？哪位高手分析下啊啊啊~ [ Last edited by zjuwrx on 2012-5-8 at 14:13 ] |
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