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【求助】新手求助！關于蛋白質異源表達純化的問題 已有2人參與
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最近開始學習做蛋白質異源表達純化，有一些問題想向大家請教： 1. 我用的是GE的GST純化系統(tǒng)，把beads和細菌裂解液4℃過夜混合，把beads加上樣緩沖液煮沸5 min，之后跑page膠發(fā)現有兩條十分明亮的帶，一條大小和純GST Tag一致（27kDa），另一條和Tag+目的蛋白大小一致（40kDa）。按我理解，不應該有單獨的GST吧。請問這樣有人遇到過這種情況嗎？ 2. 我把上述beads用凝血酶4℃過夜酶切，離心后把上清和沉淀分別跑膠。沉淀中只有27kDa的帶，而檢測不到40kDa的帶，說明目的蛋白應該是從Tag上切下來了，可是上清里沒有預想中的13kDa條帶。這有可能是因為蛋白質降解嗎？ 3. 我的上清里能夠觀察到很淡的Tag條帶，洗脫的時候是不是也會洗下少量Tag？ 謝謝大家！O(∩_∩)O |
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