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shuibingyue新蟲 (小有名氣)
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如何鑒定一個(gè)蛋白是AKT激酶的底物
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| 想驗(yàn)證AKT能否將蛋白A的ser59位點(diǎn)磷酸化，除了放射性實(shí)驗(yàn)還有其他方法嗎？A蛋白沒有磷酸化抗體。請(qǐng)高手指教，不勝感激 |
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 分子生化實(shí)驗(yàn)經(jīng)驗(yàn)積累 | 【分子生物】EPI帖 | 核酸生物學(xué)實(shí)驗(yàn)經(jīng)驗(yàn) | 蛋白質(zhì)生物學(xué)實(shí)驗(yàn)經(jīng)驗(yàn) |
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9樓2013-04-21 23:44:25
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【答案】應(yīng)助回帖
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方法有很多，我隨便說說。 樓主“想驗(yàn)證AKT能否將蛋白A的ser59位點(diǎn)磷酸化，除了放射性實(shí)驗(yàn)還有其他方法嗎？” 問題的核心是檢測(cè)出蛋白A的ser59位點(diǎn)磷酸化，那么就簡(jiǎn)單的檢測(cè)方法用質(zhì)譜檢測(cè)出磷酸化的修飾位點(diǎn)，你要是經(jīng)費(fèi)充足，愿意用MS-MS測(cè)序也行，或者培養(yǎng)出單晶體進(jìn)行X-ray diffraction，或者冷凍顯微電鏡觀測(cè)也可以。 呵呵。。。說點(diǎn)經(jīng)費(fèi)花費(fèi)少且能操作簡(jiǎn)單的：AKT與蛋白A混合入水溶液，取AKT最適合的反應(yīng)條件，加入其它底物或者反應(yīng)成分，充分反應(yīng)后，分離出蛋白A，用胰蛋白酶水解后，用質(zhì)譜測(cè)定未經(jīng)與AKT混合的天然的同一種的蛋白A，兩者對(duì)比各個(gè)肽段的分子量即可知道蛋白A的ser59位點(diǎn)是否磷酸化。 |
2樓2013-04-19 18:23:29
shuibingyue
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