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fu-guo-laing新蟲 (初入文壇)
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[求助]
誘導(dǎo)表達(dá)GST融合蛋白,結(jié)果分子量少了26KD,剛好是GST的分子量
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將目的基因插入到pGEX-4T-1載體上，然后將構(gòu)建好的重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化入BL21（DE3）感受態(tài)細(xì)胞中，用終濃度為0.25mM的IPTG誘導(dǎo)表達(dá)6h。目的基因25KD，本來用IPTG誘導(dǎo)后應(yīng)該表達(dá)的融合蛋白約為51KD，但是很奇怪，在進行SDS-PAGE時，在25KD處出現(xiàn)很明顯的條帶，而51KD處卻無明顯條帶。貌似是GST被自動切除了，或者是啟動子跳過GST而直接翻譯目的基因了？這是什么原因呀，百思不得其解？？？測序表明重組質(zhì)粒是沒有錯誤的。。。 |
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酶切專家
金蟲 (小有名氣)
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- 專業(yè): 生物大分子結(jié)構(gòu)與功能
2樓2013-04-22 21:37:25
fu-guo-laing
新蟲 (初入文壇)
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3樓2013-04-24 10:48:01
請問你這個問題解決了嗎最后，我也碰見了一摸一樣的，只表達(dá)了GST標(biāo)簽，測序是正確的。4樓2022-02-07 19:48:49
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