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loop00木蟲 (小有名氣)
阿凡達
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[求助]
GST 和 His Tag的選擇
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需要制備多抗，因此表達重組蛋白并純化，用于免疫兔子， 對多抗特異性要求高，要求重組蛋白是越純越好 GST標簽純化效果好，想用 聽說GST優(yōu)缺點，請大家一一列舉 謝謝 |
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zhaolf
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4樓2013-04-24 11:04:09
zhaolf
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【答案】應(yīng)助回帖
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感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
wizardfan: 金幣+3, 謝謝分析，以后常來 2013-04-25 06:44:16
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總體來說His tag比較好。 GST比his的specificity高,但是缺點是本身有較強的antigenecity,而且如果蛋白不溶,很難(但不是不能)用變性的方法純化.當然如果樓主用包涵體immunize兔子,那就無所謂了,可是這樣的話,也就無所謂純化不純化了. HIS如果做的好,也很純.一般來說為了防止各種潛在的失敗,可以全都用變性的方法純化蛋白,因為這樣基本可保證HIS tag露在外面,既可以和ni beads結(jié)合,而同時純度又高,再者透析之后也不影響immunization。 |
2樓2013-04-24 10:00:37
loop00
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3樓2013-04-24 10:49:54
chlorella409
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【答案】應(yīng)助回帖
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wizardfan: 金幣+3, 謝謝分享經(jīng)驗 2013-04-25 06:43:38
loop00: 金幣+2 2013-04-25 09:12:28
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wizardfan: 金幣+3, 謝謝分享經(jīng)驗 2013-04-25 06:43:38
loop00: 金幣+2 2013-04-25 09:12:28
| GST標簽作為純化是在his之前的，GST本身比較大，對蛋白表達可能有積極或消極的影響，標簽和蛋白之間加酶切位點是一貫的做法，以備是否要除去標簽。GST純化你要加尿素是不是因為你做的包涵體，尿素對蛋白本身其實是有影響的，這就牽扯到蛋白復性的問題，還涉及標簽活性。所以現(xiàn)在許多蛋白用his做標簽，一個是本身就小，特異性也好，如果怕傍柱不牢，可以加6his或者更多，關(guān)鍵是包涵體蛋白純化用his標簽就沒有尿素影響標簽的問題了。 |
5樓2013-04-24 15:13:55
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