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16srRNA基因PCR擴增條帶總出現在最下方什么原因？
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| 是魚類腐敗細菌，引物為通用引物27F和1492R，出現這樣的情況是什么原因？求高人解答 |
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【答案】應助回帖
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DNA如果可能的話最好可能定一下大致的濃度。模板太多或者太少都對PCR的結果影響很大。用的是基因組DNA嗎？nanodrop很容易測的，不行的話跑膠也可以檢測到微克級別的基因組DNA。 此外，引物濃度一般是10μM=10pmol/μl。我覺得實在不可能是差1000倍。最終的引物在PCR體系里是0.1-1μM。我感覺你的引物用的有些多。 引物的退火溫度與PCR體系里的鎂離子濃度有關，常用的鎂離子終濃度是1.5mM。不知道你使用的鎂離子stock的濃度，你可以檢查一下終濃度是否合適。不行的話你可以試試降低退火溫度。 |
11樓2013-04-29 00:30:36
cicelyzh
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