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yanmeiliu金蟲 (小有名氣)
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[交流]
有哪位在做菊花的原生質(zhì)體培養(yǎng)嗎？或者其他植物的原生質(zhì)體培養(yǎng)液可以，求經(jīng)驗(yàn)。 已有3人參與
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如題，我現(xiàn)在做菊花的原生質(zhì)體培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)，本實(shí)驗(yàn)室沒有師兄師姐做過，本科不是學(xué)生物的，理論知識(shí)比較少，導(dǎo)師也不給指導(dǎo)，所以所有的方法都是自己在摸索，但是現(xiàn)在每次酶解出的原生質(zhì)體活力都非常的低，所以在培養(yǎng)的時(shí)候根本看不到細(xì)胞分裂，想了很多改善的方法都沒有結(jié)果，現(xiàn)在都研二下學(xué)期了，很著急，感覺也進(jìn)行不下去了，唉，每天都實(shí)驗(yàn)折磨的都要抑郁了，老板也在變本加厲的折磨我。 哪位前輩做過，能否給些指導(dǎo)？不勝感激。 |
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yanmeiliu
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2樓2013-05-01 12:08:29
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3樓2013-05-01 16:17:53
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好的，謝謝您。 下面是我做的具體的步驟： 酶解液的配置：1.5%纖維素酶+0.5%果膠酶+1%MES+0.5mol/L甘露醇 溶于CPW溶液中，55℃ 10min 然后調(diào)節(jié)ph=5.6，抽濾滅菌備用。 1、取生長(zhǎng)35天左右的組培苗，把葉片切成1mm寬左右，在黑暗條件下酶解。 2、每隔2、4、6h 取樣觀察酶解情況，并檢測(cè)活力。 3.純化的過程如下：酶解結(jié)束后先過濾，然后1000rmp 5 min ,吸取粗提物注入另一個(gè)25%蔗糖的離心管的頂部， 離心1000rmp 3 min，看文獻(xiàn)說是原生質(zhì)體在酶解液和蔗糖溶液間形成一條綠色的帶狀，感覺我離心出來的并不明顯啊。不知道為什么？？哪里出問題了？ 最后是有一條綠色的帶狀，但是不明顯。純化出來的原生質(zhì)體感覺和純化前沒區(qū)別。并且感覺浪費(fèi)了很多原生質(zhì)體。。。操作有問題嗎？ 還有，我選的材料用的是菊花的所有葉片，而不是頂芽上的葉片，是不是也有影響呢？ 最關(guān)鍵的是測(cè)活力的時(shí)候感覺很少原生質(zhì)體是活的，我是采用番紅花紅T染色法測(cè)定原生質(zhì)體活力。染液配制：將番紅花紅T溶于含有甘露醇0.5mol /L的CPW溶液巾，配成濃度為0.1%的染 液備用。取染液和原生質(zhì)體懸浮液各一滴混合，靜置染色3?5min.,光學(xué)顯微鏡下分別計(jì)數(shù)被染成紅色的原生質(zhì)體數(shù)和原生質(zhì)體的總數(shù)，觀察10個(gè)視野，3次重復(fù)。 到底是哪里出問題了？ 請(qǐng)高手幫忙分析一下。謝謝 |
4樓2013-05-01 20:58:39
嘣哆—abc
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初識(shí)樓主困境，小生倍有感觸！依照樓主的實(shí)驗(yàn)?zāi)康模∩J(rèn)為，是所選材料的部位上！雖然植物各個(gè)細(xì)胞均有一定的細(xì)胞全能性，只是這種潛能的大小上有(顯著)差異！如生殖細(xì)胞>其它體細(xì)胞，分生組織(莖基部)細(xì)胞>其它組織細(xì)胞等等！呵呵～我想聰明的您應(yīng)當(dāng)找到答案了！(依照樓主發(fā)帖時(shí)間，這時(shí)菊科植物，尤其是菊花，在這個(gè)季節(jié)其腳芽特別多！您不妨選用它或根部分生組織！友情提醒，這部分組織材料若從土壤栽培的植物株取來的，要充分滅菌啊！) 一點(diǎn)兒愚見，見笑了！ 恭候佳音～ 愿你有個(gè)好心情！～ [ 發(fā)自手機(jī)版 http://www.gaoyang168.com/3g ] |
5樓2013-05-06 21:33:57
yanmeiliu
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6樓2013-05-07 09:44:47
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呵呵…我是一個(gè)業(yè)余愛好者！是做遺傳方面的！依我愚見，樓主可能沒有理解細(xì)胞全能性的真正內(nèi)涵，否則就不會(huì)那么草率的選菊花的葉片作材料了！依照菊科植物生物學(xué)特征，它莖易木質(zhì)化，葉片將趨于高度分化！因而，您想重新啟動(dòng)其全能性，就必須得先脫分化，然后再談其全能性的潛能的激發(fā)——獲得愈傷組織，接著應(yīng)當(dāng)是組織器官的誘導(dǎo)了！(一點(diǎn)愚見，望海涵！記得，百折不撓，不斷的尋求突破！加油喔～) 哈哈哈～很高興認(rèn)識(shí)您～ 我的郵箱670122575@qq.com,有空請(qǐng)給我留言！非誠(chéng)請(qǐng)勿擾～ 祝你天天有個(gè)好心情 [ 發(fā)自手機(jī)版 http://www.gaoyang168.com/3g ] |
7樓2013-05-07 12:58:33
yanmeiliu
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8樓2013-05-07 15:40:01
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9樓2013-05-07 20:32:21
godl_roshan
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不知道樓主實(shí)驗(yàn)進(jìn)展到什么程度了現(xiàn)在？我曾經(jīng)也嘗試過一些菊花原生質(zhì)體的分離和培養(yǎng)，不過很遺憾，也沒搞成，一直不分裂。不過我可能比較偷懶，也沒測(cè)它們的活力，我有個(gè)問題想請(qǐng)教一下，你能確保你測(cè)活力的方法靠譜嗎？就是說你測(cè)出的活力的結(jié)果是否能正確反映它們的真實(shí)情況？有沒有可能原生質(zhì)體是活的，但也會(huì)認(rèn)為是死的？ 另外，分離我倒是能分離挺多的原生質(zhì)體，顯微鏡下觀察比較純，也挺圓（活力不知道…… ：）），用的材料也是組培苗，這結(jié)果，材料很關(guān)鍵，并不是所有葉片都用，最上面的嫩葉不用，最底部的老葉（深綠）不用，用的主要是中部的鮮綠葉片，然后處理的時(shí)間方法等等也都需要摸索一下……一點(diǎn)經(jīng)驗(yàn)，希望能對(duì)你有所幫助 |
10樓2013-12-23 09:46:44
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