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yanmeiliu金蟲 (小有名氣)
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[交流]
有哪位在做菊花的原生質(zhì)體培養(yǎng)嗎？或者其他植物的原生質(zhì)體培養(yǎng)液可以，求經(jīng)驗。 已有3人參與
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如題，我現(xiàn)在做菊花的原生質(zhì)體培養(yǎng)實驗，本實驗室沒有師兄師姐做過，本科不是學(xué)生物的，理論知識比較少，導(dǎo)師也不給指導(dǎo)，所以所有的方法都是自己在摸索，但是現(xiàn)在每次酶解出的原生質(zhì)體活力都非常的低，所以在培養(yǎng)的時候根本看不到細胞分裂，想了很多改善的方法都沒有結(jié)果，現(xiàn)在都研二下學(xué)期了，很著急，感覺也進行不下去了，唉，每天都實驗折磨的都要抑郁了，老板也在變本加厲的折磨我。 哪位前輩做過，能否給些指導(dǎo)？不勝感激。 |
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嘣哆—abc
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小木蟲: 金幣+0.5, 給個紅包，謝謝回帖
小木蟲: 金幣+0.5, 給個紅包，謝謝回帖
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呵呵…我是一個業(yè)余愛好者！是做遺傳方面的！依我愚見，樓主可能沒有理解細胞全能性的真正內(nèi)涵，否則就不會那么草率的選菊花的葉片作材料了！依照菊科植物生物學(xué)特征，它莖易木質(zhì)化，葉片將趨于高度分化！因而，您想重新啟動其全能性，就必須得先脫分化，然后再談其全能性的潛能的激發(fā)——獲得愈傷組織，接著應(yīng)當(dāng)是組織器官的誘導(dǎo)了！(一點愚見，望海涵！記得，百折不撓，不斷的尋求突破！加油喔～) 哈哈哈～很高興認識您～ 我的郵箱670122575@qq.com,有空請給我留言！非誠請勿擾～ 祝你天天有個好心情 [ 發(fā)自手機版 http://www.gaoyang168.com/3g ] |
7樓2013-05-07 12:58:33
yanmeiliu
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2樓2013-05-01 12:08:29
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3樓2013-05-01 16:17:53
yanmeiliu
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好的，謝謝您。 下面是我做的具體的步驟： 酶解液的配置：1.5%纖維素酶+0.5%果膠酶+1%MES+0.5mol/L甘露醇 溶于CPW溶液中，55℃ 10min 然后調(diào)節(jié)ph=5.6，抽濾滅菌備用。 1、取生長35天左右的組培苗，把葉片切成1mm寬左右，在黑暗條件下酶解。 2、每隔2、4、6h 取樣觀察酶解情況，并檢測活力。 3.純化的過程如下：酶解結(jié)束后先過濾，然后1000rmp 5 min ,吸取粗提物注入另一個25%蔗糖的離心管的頂部， 離心1000rmp 3 min，看文獻說是原生質(zhì)體在酶解液和蔗糖溶液間形成一條綠色的帶狀，感覺我離心出來的并不明顯啊。不知道為什么？？哪里出問題了？ 最后是有一條綠色的帶狀，但是不明顯。純化出來的原生質(zhì)體感覺和純化前沒區(qū)別。并且感覺浪費了很多原生質(zhì)體。。。操作有問題嗎？ 還有，我選的材料用的是菊花的所有葉片，而不是頂芽上的葉片，是不是也有影響呢？ 最關(guān)鍵的是測活力的時候感覺很少原生質(zhì)體是活的，我是采用番紅花紅T染色法測定原生質(zhì)體活力。染液配制：將番紅花紅T溶于含有甘露醇0.5mol /L的CPW溶液巾，配成濃度為0.1%的染 液備用。取染液和原生質(zhì)體懸浮液各一滴混合，靜置染色3?5min.,光學(xué)顯微鏡下分別計數(shù)被染成紅色的原生質(zhì)體數(shù)和原生質(zhì)體的總數(shù)，觀察10個視野，3次重復(fù)。 到底是哪里出問題了？ 請高手幫忙分析一下。謝謝 |
4樓2013-05-01 20:58:39
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