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guochuan104新蟲 (初入文壇)
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[求助]
為啥總是提不出自然界微生物群落的總DNA
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各位大俠，小妹又來問啦~ 小妹我最近做的實驗是從載體上收集盡可能多的微生物，提取這些微生物的DNA： 1） 加0.6mL TE懸浮沉淀，并加30µL10%SDS，5µL 20mg/mL蛋白酶K，強烈震蕩至均勻，37℃恒溫反應0.5~1h。 3) 加1.5mL5mol/LNaCl溶液，混勻。 4) 加1.5mLCTAB/NaCl溶液，混勻，65℃恒溫靜置20min。 5) 用等體積氯仿：異戊醇（24:1）抽提兩次，輕輕緩慢混勻，8000 r/min, 25℃離心10min，將上清液移至10mL無菌離心管。 6) 加等體積異丙醇，顛倒混勻，室溫下靜置30min，沉淀DNA。5000r/min離心10min，倒出上層廢液，用70%乙醇漂洗后，吸干，溶于適量的TE，-20℃保存，以備后續(xù)實驗。 第一次我取了0.2g收集的微生物，沉淀時看到有碎碎的白色碎片，跑膠沒看到DNA，第二次取了0.4g，沉淀時有白色薄膜，跑膠看到DNA但沒有很亮。中間有別的實驗就把提的DNA放冰箱了三天，昨天用引物338-518做RCR，25ul體系里加4ul模板，35個循環(huán)，跑膠出來只有引物二聚體！而拿我同門提的養(yǎng)殖場沼渣DNA做對照也P了，有短片段的條帶，求問這到底是什么問題~ |
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zhenwuhuang
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