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[求助]
包涵體復性
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| 包涵體過鎳柱，并進行了尿素梯度透析，6M-0M，請問一下，梯度透析之后尿素能除凈嗎，怎么鑒別尿素是否除凈，蛋白是否復性成功？之后要做抑菌試驗的，尿素一定要除去的。希望大家給點意見。 |
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不轉(zhuǎn)錄的DNA
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【答案】應助回帖
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感謝參與，應助指數(shù) +1
小蟲子MM(amisking代發(fā)): 金幣+4 2013-05-22 21:40:12
小蟲子MM: 金幣+11 2013-05-25 15:49:06
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小蟲子MM: 金幣+11 2013-05-25 15:49:06
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樓上幾位說的都很有道理！ 我不知你倒數(shù)第二步的Urea濃度是2M，還是1M？ 打個比方，假如你倒數(shù)第二步的Urea濃度是1M！你蛋白的體系是20ml，你0M Urea的buffer是2L！ 1）.假如你將20ml含1M Urea的protein復性到0M Urea的buffer 2L中！你可以計算一下，你最終體系中的Urea含量應該是10mM! 2).假如你將20ml含1M Urea的protein復性到0M Urea的buffer 1L中，到體系內(nèi)外達到平衡后再復性到0M Urea的buffer 1L中�。ㄒ簿褪菗Q液一次！）你最終Urea的濃度被稀釋50*50=2500倍！也就是最終含有0.4mM的Urea！ 建議你復性的時間長點！一天或者更長（只是針對比較復雜的蛋白復性來說）！一般蛋白復性6~7h就夠了！ 并不是所有蛋白復性都需要加Arg和GSH氧化還原系統(tǒng)！有的蛋白在PBS等緩沖體系中就能復性！不需要添加任何穩(wěn)定劑的！你添加Arg是增加了protein refolding 的中間結(jié)構(gòu)的穩(wěn)定性！但也避免不了你又引入新的干擾因子！Arg可能對你做科研實驗有一定的影響！所以能不加就不加�。�！ 氧化還原系統(tǒng)只是針對還有二硫鍵的蛋白的renaturation有作用！如果你的protein不含有巰基怎么辦呢？那不是又白加了嗎？？？？（好吧！我扯得太遠了�。�  ）希望以上建議對你有用！ |
4樓2013-05-22 18:55:07
qianshengguo
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2樓2013-05-22 14:22:58
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5樓2013-05-22 21:37:40
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