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[求助]
包涵體復(fù)性
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| 包涵體過鎳柱，并進(jìn)行了尿素梯度透析，6M-0M，請(qǐng)問一下，梯度透析之后尿素能除凈嗎，怎么鑒別尿素是否除凈，蛋白是否復(fù)性成功？之后要做抑菌試驗(yàn)的，尿素一定要除去的。希望大家給點(diǎn)意見。 |
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5樓2013-05-22 21:37:40
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【答案】應(yīng)助回帖
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感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
小蟲子MM(amisking代發(fā)): 金幣+4 2013-05-22 21:40:12
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樓上幾位說的都很有道理！ 我不知你倒數(shù)第二步的Urea濃度是2M，還是1M？ 打個(gè)比方，假如你倒數(shù)第二步的Urea濃度是1M！你蛋白的體系是20ml，你0M Urea的buffer是2L！ 1）.假如你將20ml含1M Urea的protein復(fù)性到0M Urea的buffer 2L中！你可以計(jì)算一下，你最終體系中的Urea含量應(yīng)該是10mM! 2).假如你將20ml含1M Urea的protein復(fù)性到0M Urea的buffer 1L中，到體系內(nèi)外達(dá)到平衡后再復(fù)性到0M Urea的buffer 1L中！（也就是換液一次�。┠阕罱KUrea的濃度被稀釋50*50=2500倍！也就是最終含有0.4mM的Urea！ 建議你復(fù)性的時(shí)間長(zhǎng)點(diǎn)！一天或者更長(zhǎng)（只是針對(duì)比較復(fù)雜的蛋白復(fù)性來說）！一般蛋白復(fù)性6~7h就夠了！ 并不是所有蛋白復(fù)性都需要加Arg和GSH氧化還原系統(tǒng)！有的蛋白在PBS等緩沖體系中就能復(fù)性！不需要添加任何穩(wěn)定劑的！你添加Arg是增加了protein refolding 的中間結(jié)構(gòu)的穩(wěn)定性！但也避免不了你又引入新的干擾因子！Arg可能對(duì)你做科研實(shí)驗(yàn)有一定的影響！所以能不加就不加！�。� 氧化還原系統(tǒng)只是針對(duì)還有二硫鍵的蛋白的renaturation有作用！如果你的protein不含有巰基怎么辦呢？那不是又白加了嗎？？？？（好吧！我扯得太遠(yuǎn)了！！  ）希望以上建議對(duì)你有用！ |
4樓2013-05-22 18:55:07
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