 |
 |
 |
 |
 |
 |
||
 |
 |
 |
 |
 |
| 5 | 1/1 | 返回列表 |
| 查看: 2172 | 回復(fù): 8 | |||
| 當(dāng)前只顯示滿足指定條件的回帖，點(diǎn)擊這里查看本話題的所有回帖 | |||
[求助]
包涵體復(fù)性
|
|||
| 包涵體過(guò)鎳柱，并進(jìn)行了尿素梯度透析，6M-0M，請(qǐng)問一下，梯度透析之后尿素能除凈嗎，怎么鑒別尿素是否除凈，蛋白是否復(fù)性成功？之后要做抑菌試驗(yàn)的，尿素一定要除去的。希望大家給點(diǎn)意見。 |
回復(fù)此樓» 猜你喜歡
291求調(diào)劑
已經(jīng)有6人回復(fù)
-
315分求調(diào)劑
已經(jīng)有6人回復(fù)
-
277跪求調(diào)劑
已經(jīng)有8人回復(fù)
-
295求調(diào)劑
已經(jīng)有5人回復(fù)
-
295材料工程專碩求調(diào)劑
已經(jīng)有3人回復(fù)
-
085701環(huán)境工程求調(diào)劑
已經(jīng)有5人回復(fù)
-
083000學(xué)碩274求調(diào)劑
已經(jīng)有4人回復(fù)
-
275求調(diào)劑
已經(jīng)有8人回復(fù)
-
一志愿211院校 344分 東北農(nóng)業(yè)大學(xué)生物學(xué)學(xué)碩，求調(diào)劑
已經(jīng)有8人回復(fù)
-
085602 307分 求調(diào)劑
已經(jīng)有5人回復(fù)
生物小通
木蟲 (正式寫手)
- 應(yīng)助: 29 (小學(xué)生)
- 金幣: 1298.3
- 散金: 1069
- 紅花: 5
- 帖子: 774
- 在線: 335.3小時(shí)
- 蟲號(hào): 1537514
- 注冊(cè): 2011-12-14
- 性別: GG
- 專業(yè): 腫瘤復(fù)發(fā)與轉(zhuǎn)移
【答案】應(yīng)助回帖
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
|
來(lái)學(xué)習(xí)的，我們也做變性復(fù)性的，如果是復(fù)性抗體的話，是否成功好檢測(cè)，但是其他的就不清楚了。根據(jù)我們復(fù)性抗體知道復(fù)性是非常困難的。 第一，復(fù)性條件要具體情況具體分析，尤其是有二硫鍵，氧化還原系統(tǒng)的比例要具體分析并控制。 第二，復(fù)性成功率，即便是能夠找到復(fù)性的條件，但是復(fù)性成功率依舊是個(gè)問題，好似一般的在20%左右，當(dāng)然這個(gè)跟蛋白的關(guān)系很大。 第三，透析濃縮，你在變性復(fù)性、透析濃縮中，隨時(shí)間推移，蛋白質(zhì)自身就會(huì)失活，尤其是在透析濃縮中，因?yàn)榈鞍诐舛冉档�，本身失活，透析并不是無(wú)菌環(huán)境，因此會(huì)降解。時(shí)間越久，損失越大，可以通過(guò)SDS-PAGE分析蛋白降解問題。 由上面可以知道，我們這種研究所，一般沒有特別優(yōu)秀的老師指導(dǎo)及特殊設(shè)備復(fù)性，真正成功并獲取活性的蛋白會(huì)非常非常�。ó�(dāng)然這個(gè)一般的蛋白在無(wú)特殊設(shè)備的情況下很難確定是否復(fù)性成功）。 我是用的可溶性表達(dá)，建議以可溶性表達(dá)進(jìn)行優(yōu)化表達(dá)條件，或者換載體之類的。這種成功的可能性更大。 |
7樓2013-05-24 09:32:20
qianshengguo
銅蟲 (小有名氣)
- 應(yīng)助: 22 (小學(xué)生)
- 金幣: 283.9
- 紅花: 2
- 帖子: 113
- 在線: 48.5小時(shí)
- 蟲號(hào): 1455411
- 注冊(cè): 2011-10-22
- 性別: GG
- 專業(yè): 蛋白質(zhì)組學(xué)
2樓2013-05-22 14:22:58
會(huì)思想的蘆葦
金蟲 (正式寫手)
- BioEPI: 2
- 應(yīng)助: 11 (小學(xué)生)
- 金幣: 1415.8
- 紅花: 2
- 帖子: 360
- 在線: 166.2小時(shí)
- 蟲號(hào): 1360621
- 注冊(cè): 2011-08-04
- 專業(yè): 生物技術(shù)藥物
3樓2013-05-22 14:40:25
不轉(zhuǎn)錄的DNA
金蟲 (小有名氣)
- BioEPI: 3
- 應(yīng)助: 47 (小學(xué)生)
- 金幣: 573.5
- 散金: 4
- 紅花: 2
- 帖子: 157
- 在線: 85.2小時(shí)
- 蟲號(hào): 2454044
- 注冊(cè): 2013-05-08
- 性別: GG
- 專業(yè): 蛋白質(zhì)組學(xué)
【答案】應(yīng)助回帖
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
小蟲子MM(amisking代發(fā)): 金幣+4 2013-05-22 21:40:12
小蟲子MM: 金幣+11 2013-05-25 15:49:06
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
小蟲子MM(amisking代發(fā)): 金幣+4 2013-05-22 21:40:12
小蟲子MM: 金幣+11 2013-05-25 15:49:06
|
樓上幾位說(shuō)的都很有道理！ 我不知你倒數(shù)第二步的Urea濃度是2M，還是1M？ 打個(gè)比方，假如你倒數(shù)第二步的Urea濃度是1M！你蛋白的體系是20ml，你0M Urea的buffer是2L！ 1）.假如你將20ml含1M Urea的protein復(fù)性到0M Urea的buffer 2L中！你可以計(jì)算一下，你最終體系中的Urea含量應(yīng)該是10mM! 2).假如你將20ml含1M Urea的protein復(fù)性到0M Urea的buffer 1L中，到體系內(nèi)外達(dá)到平衡后再?gòu)?fù)性到0M Urea的buffer 1L中！（也就是換液一次�。┠阕罱KUrea的濃度被稀釋50*50=2500倍！也就是最終含有0.4mM的Urea！ 建議你復(fù)性的時(shí)間長(zhǎng)點(diǎn)！一天或者更長(zhǎng)（只是針對(duì)比較復(fù)雜的蛋白復(fù)性來(lái)說(shuō)）！一般蛋白復(fù)性6~7h就夠了！ 并不是所有蛋白復(fù)性都需要加Arg和GSH氧化還原系統(tǒng)！有的蛋白在PBS等緩沖體系中就能復(fù)性！不需要添加任何穩(wěn)定劑的！你添加Arg是增加了protein refolding 的中間結(jié)構(gòu)的穩(wěn)定性！但也避免不了你又引入新的干擾因子！Arg可能對(duì)你做科研實(shí)驗(yàn)有一定的影響！所以能不加就不加�。�！ 氧化還原系統(tǒng)只是針對(duì)還有二硫鍵的蛋白的renaturation有作用！如果你的protein不含有巰基怎么辦呢？那不是又白加了嗎？？？？（好吧！我扯得太遠(yuǎn)了��！  ）希望以上建議對(duì)你有用！ |
4樓2013-05-22 18:55:07
| 最具人氣熱帖推薦 [查看全部] | 作者 | 回/看 | 最后發(fā)表 | |
|---|---|---|---|---|
|
[有機(jī)交流]
高溫高壓反應(yīng)求助
 10+3
|
chibby 2026-03-25 | 3/150 |
|
|---|---|---|---|---|
|
|
[考研] 285求調(diào)劑 +3 | AZMK 2026-03-27 | 5/250 |
|
|
[考研] 一志愿北京化工大學(xué)材料與化工 264分各科過(guò)A區(qū)國(guó)家線 +10 | 哈哈157349 2026-03-21 | 10/500 |
|
|
|
[考研] 292求調(diào)劑 +4 | 求求了收下我吧?/a> 2026-03-26 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 求調(diào)劑 +6 | 林之夕 2026-03-24 | 6/300 |
|
|
|
[考研]
材料學(xué)碩，求調(diào)劑
6+5
|
糖葫蘆888ll 2026-03-22 | 10/500 |
|
|
|
[考研] 333求調(diào)劑 +6 | wfh030413@ 2026-03-23 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 一志愿華理，數(shù)一英一285求A區(qū)調(diào)劑 +8 | AZMK 2026-03-25 | 10/500 |
|
|
|
[考研] 329求調(diào)劑 +5 | 1() 2026-03-22 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 081200-11408-276學(xué)碩求調(diào)劑 +3 | 崔wj 2026-03-26 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 309求調(diào)劑 +4 | gajsj 2026-03-25 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 求調(diào)劑 +3 | QiMing7 2026-03-25 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 318求調(diào)劑 +5 | plum李子 2026-03-21 | 8/400 |
|
|
|
[考研] 食品專碩 一志愿雙一流 328 +3 | xiaom99 2026-03-21 | 4/200 |
|
|
|
[考研]
 085404電子信息284分求調(diào)劑
+4
|
13659058978 2026-03-24 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 一志愿山東大學(xué)藥學(xué)學(xué)碩求調(diào)劑 +3 | 開開心心沒煩惱 2026-03-23 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 070300，一志愿北航320求調(diào)劑 +3 | Jerry0216 2026-03-22 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 求調(diào)劑一志愿海大，0703化學(xué)學(xué)碩304分，有大創(chuàng)項(xiàng)目，四級(jí)已過(guò) +6 | 幸運(yùn)哩哩 2026-03-22 | 10/500 |
|
|
|
[考研] 308求調(diào)劑 +3 | 墨墨漠 2026-03-21 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 求助 +5 | 夢(mèng)里的無(wú)言 2026-03-21 | 6/300 |
|