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...山雨新蟲 (初入文壇)
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[求助]
昆蟲基因組提取
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昆蟲基因組濃縮與純化: 1. 將樣品置于 1.5 mL 離心管中,在每一樣品中加入等體積的酚/氯仿/異戊醇溶液,將管中樣品振蕩混合成乳狀液體; 2. 室溫下,12000 r/min 離心 1 min; 3. 吸取上層水相層到另一潔凈的離心管中,再次加入等體積的酚/氯仿/異戊醇溶液,混勻,室溫下 12000 r/mi n離心 1 min; 4. 吸取上層水相轉(zhuǎn)移到另一潔凈離心管中,加入等體積的水飽和乙醚,混勻,靜置 5 min 待有機(jī)相與水相分層,棄上清乙醚; 5. 置于 68℃溫育 10 min,不時用手指彈動管壁,使乙醚充分揮發(fā); 6. 加入 1/10 體積的乙酸鈉溶液(3 mol/L,pH5.2),上下顛倒離心管使溶液充分混勻; 7. 準(zhǔn)確加入 2 倍體積的預(yù)冷的無水乙醇,上下顛倒混勻,-20℃靜置 1 h使 DNA 充分沉淀; 8. 4℃,12000 r/min 離心 10 min,棄上清; 9. 加入 70% 預(yù)冷的乙醇至管中 2/3 體積,混勻漂洗以去除殘余的鹽,高速離心(4℃,12000 r/min,5 min),棄盡上清; 10. 室溫放置 15 min 左右,使乙醇完全揮發(fā),加入適當(dāng)體積的雙蒸水或 TE 溶液重溶 DNA 沉淀。 請問:步驟中加入乙醚的具體作用?這步可以省略嗎? |
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