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蟈蟈蟲26新蟲 (初入文壇)
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[求助]
候選基因序列無變化，但是表達量有差異，這是什么原因引起的？
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（1）我的候選基因有8個，然后我均測了cDNA，沒有差異。實在沒辦法，我就只好做個半定量，然后發(fā)現其中有一個基因是有表達量的差異的。（材料1圖片是一個基因，我做了兩遍，這兩張圖前面兩個是野生型，后面的兩個是突變體。）我做了好幾遍，都得到這樣的結果，其他的候選基因表達量是完全一樣的亮度。那我就覺得應該是這個基因，可是我又測了這個基因的啟動子，發(fā)現啟動子也沒有差異，但是表達量上又有差異。我就解釋不了這個問題了？看了文獻說有可能是表觀遺傳學，那我要怎么進行驗證呢？ （2）第二個郁悶的事情是：另外一個材料區(qū)間里也有很多候選基因，我也像上一個材料一樣也是全部測了cDNA，但是也沒有差異，然后做半定量的時候發(fā)現有兩個基因有表達量的差異，而且這兩個基因中間還有8個基因，其他的8個都沒有差異，然后我做了3遍，都是這樣的結果，（材料2-1和2-2這兩個基因：前面兩個都是突變體，后面兩個是野生型）。當然這兩個基因，我的啟動子還沒有測序，正在做……我不理解的問題是為什么會有兩個基因出現這種變化呢？ 這兩個材料都是隱性核基因控制的，因為符合3:1的農藝性狀。而且是由EMS誘變得到的。 我的問題是： （1）材料1中為什么半定量驗證的時候表達量有差異，可是啟動子和cDNA都沒有差異？ （2）如果材料1可能是表觀遺傳學，那我可以怎么進行驗證？通過專門的測序嗎？能不能介紹幾篇相關的文獻？ （3）材料2中為什么兩個基因都出現表達量的變化？ （4）我想問如果是某個候選基因引起的這種性狀，那么是不是在表達量上這個基因就肯定有變化？有沒有會出現表達量不變化的情況？ 材料1.jpg 材料2-1.jpg 材料2-2.jpg |
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【答案】應助回帖
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感謝參與，應助指數 +1
蟈蟈蟲26: 金幣+5, ★★★很有幫助 2013-05-30 08:43:35
感謝參與，應助指數 +1
蟈蟈蟲26: 金幣+5, ★★★很有幫助 2013-05-30 08:43:35
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假設你的F2分離實驗找對了區(qū)域: （1）材料1中為什么半定量驗證的時候表達量有差異，可是啟動子和cDNA都沒有差異？ >>可能啟動子找的范圍還沒有足夠大, 你把范圍擴大點吧. （2）如果材料1可能是表觀遺傳學，那我可以怎么進行驗證？通過專門的測序嗎？能不能介紹幾篇相關的文獻？ >>我建議先不要驗證表觀遺傳的東西(范圍太寬了), 先做一個構建(RNAi, 或者35S, 根據你發(fā)現的表達變化來定)轉植物, 如果表型是和你懷疑的基因表達量相關, 你應該會從轉基因植物上發(fā)現類似的表型. 確定了這個再好好研究是什么機理. （3）材料2中為什么兩個基因都出現表達量的變化？ >>這個問題不會, 但是我覺得有表型的突變體應該有很多基因表達水平有變化, 或許你的材料2中其中一個基因就是屬于這種情況. （4）我想問如果是某個候選基因引起的這種性狀，那么是不是在表達量上這個基因就肯定有變化？有沒有會出現表達量不變化的情況？ >>不一定, 點突變一般不會影響基因的表達水平. 但是如果表達量不變, 蛋白序列也不變, 多半說明不是這個基因一起表型吧. |
2樓2013-05-29 00:40:01
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