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qinhuan0425新蟲 (初入文壇)
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[交流]
RNA逆轉(zhuǎn)錄DNA 已有9人參與
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| 請教：用Takara的逆轉(zhuǎn)錄試劑盒，推薦程序?yàn)?7度15分鐘，85度15秒，PCR儀上設(shè)置為37度15分鐘，85度15秒，end.逆轉(zhuǎn)錄完后晚了20分鐘將產(chǎn)物拿出，會影響cDNA得率嗎？ |
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porphybaby
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小木蟲: 金幣+0.5, 給個紅包，謝謝回帖
gyesang: 金幣+2, 鼓勵回帖應(yīng)助！ 2013-06-03 18:18:02
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不會的 因?yàn)槟?5℃ 15 s 目的就是讓 反轉(zhuǎn)錄酶 失活 終止反轉(zhuǎn)錄反應(yīng) 自從這個之后 你原先體系有多少cDNA 就是多少了 不會再增多 也不會說 再減少 因?yàn)橐呀?jīng)轉(zhuǎn)成了 cDNA 它已經(jīng)不再是RNA 因此沒那么脆弱 不容易降解 你接下來的操作 都可以在外面進(jìn)行 另外我不知道你的意思是 85℃ 持續(xù)了20分鐘 還是 說 85℃結(jié)束后 停止加熱 恢復(fù)到室溫 20分鐘后你取出 如果你是 持續(xù)加熱那么長時間的話 可能會有一定影響吧 |
4樓2013-06-03 00:06:35
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bullfrog325
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10樓2013-06-04 11:39:05
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