 |
 |
 |
 |
 |
 |
||
 |
 |
 |
 |
 |
| 5 | 1/1 | 返回列表 |
| 查看: 2079 | 回復(fù): 10 | ||||
| 當(dāng)前只顯示滿(mǎn)足指定條件的回帖，點(diǎn)擊這里查看本話(huà)題的所有回帖 | ||||
yhdchina新蟲(chóng) (初入文壇)
|
[交流]
怎樣能得到高純度的蛋白？ 已有4人參與
|
|||
| 我用Ni離子親和層析純化融合蛋白，6個(gè)His標(biāo)簽在載體端，然后柱上用腸激酶4°C過(guò)夜將載體與目的多肽切開(kāi)，純化得到我的目的多肽（約4.2KDa），此多肽是存在于腸激酶緩沖液中的。在中科新生命用RP-HPLC測(cè)純度只有50%，不知道怎么回事，怎樣能得到純度>95%的蛋白呢？ |
回復(fù)此樓» 猜你喜歡
蛋白質(zhì)檢測(cè)：精準(zhǔn)分析，解鎖生物分子的密碼
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之小鼠實(shí)驗(yàn)：嚴(yán)謹(jǐn)設(shè)計(jì)，解析生命機(jī)制的重要載體
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
化學(xué)工程及工業(yè)化學(xué)論文潤(rùn)色/翻譯怎么收費(fèi)?
已經(jīng)有160人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之重金屬檢測(cè)：精準(zhǔn)篩查，守護(hù)健康與環(huán)境的防線
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之“蛙測(cè)重金屬我背鍋三千”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之“鼠逃三次我發(fā)三篇SCI”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
納米粒度分析
已經(jīng)有3人回復(fù)
-
林科院林化所招收材料與化工專(zhuān)業(yè)碩士，坐標(biāo)南京
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
留學(xué)--博士招生
已經(jīng)有15人回復(fù)
-
化學(xué)工程，本211，求調(diào)劑，ab區(qū)不限
已經(jīng)有4人回復(fù)
» 本主題相關(guān)價(jià)值貼推薦，對(duì)您同樣有幫助:
- 原核表達(dá)形成了包涵體怎么辦��？
已經(jīng)有22人回復(fù)
凌波麗
專(zhuān)家顧問(wèn) (知名作家)
-
專(zhuān)家經(jīng)驗(yàn): +218 - MolEPI: 44
- 應(yīng)助: 397 (碩士)
- 貴賓: 0.044
- 金幣: 2118.9
- 散金: 10
- 紅花: 208
- 帖子: 5633
- 在線: 571.6小時(shí)
- 蟲(chóng)號(hào): 1766465
- 注冊(cè): 2012-04-19
- 性別: MM
- 專(zhuān)業(yè): 生物大分子結(jié)構(gòu)與功能
- 管轄: 生物科學(xué)綜合
9樓2013-06-10 11:57:35
凌波麗
專(zhuān)家顧問(wèn) (知名作家)
-
專(zhuān)家經(jīng)驗(yàn): +218 - MolEPI: 44
- 應(yīng)助: 397 (碩士)
- 貴賓: 0.044
- 金幣: 2118.9
- 散金: 10
- 紅花: 208
- 帖子: 5633
- 在線: 571.6小時(shí)
- 蟲(chóng)號(hào): 1766465
- 注冊(cè): 2012-04-19
- 性別: MM
- 專(zhuān)業(yè): 生物大分子結(jié)構(gòu)與功能
- 管轄: 生物科學(xué)綜合
★ ★ ★ ★
小木蟲(chóng): 金幣+0.5, 給個(gè)紅包，謝謝回帖
kx444555: 金幣+3, 很詳細(xì)，鼓勵(lì)交流 2013-06-09 22:03:41
小木蟲(chóng): 金幣+0.5, 給個(gè)紅包，謝謝回帖
kx444555: 金幣+3, 很詳細(xì)，鼓勵(lì)交流 2013-06-09 22:03:41
|
蛋白質(zhì)的親和層析的基礎(chǔ)是蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用或者蛋白質(zhì)-其他分子相互作用，這樣的相互作用的專(zhuān)一性很高，但是不是100%，因?yàn)榈鞍踪|(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用的表面積也就是1000-2000平方埃最多，少一些600平方埃也有，每個(gè)氨基酸殘基的表面積大的200平方埃，小的80平方埃，也就是說(shuō)蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用也就是彼此6-10個(gè)氨基酸的表面的分子識(shí)別而已，不可能是絕對(duì)專(zhuān)一。所以抗體-抗原反應(yīng)還存在交叉反應(yīng)哪。蛋白質(zhì)-其他分子相互作用可能比蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用，因?yàn)橹辽儆袡C(jī)和無(wú)機(jī)小分子的表面積一般達(dá)不到6個(gè)氨基酸殘基的表面積，所以可能分子識(shí)別的精確度會(huì)相對(duì)更低。所以不要完全寄希望于親和層析一步就能完成分離純化，之前之后都應(yīng)該使用別的蛋白質(zhì)分離純化方法。需要注意三個(gè)問(wèn)題： 1.蛋白質(zhì)的親和層析應(yīng)該在蛋白質(zhì)的后期分離時(shí)使用，在親和層析之前樣品應(yīng)該用其他方法盡量純化，減少親和層析的分離純化負(fù)擔(dān)。蛋白質(zhì)分離純化的前期處理可用分級(jí)離心、沉淀、超濾和透析等粗分離方法；之后的細(xì)分離方法可用離子交換樹(shù)脂、分子篩層析、疏水層析等。要不輕易用電泳來(lái)分離純化，因?yàn)椴缓脧?fù)性，用電泳做檢測(cè)比較好，然后還可以疏水層析和親和層析，親和層析之后可以再用分子篩層析和疏水層析。 2.蛋白質(zhì)的親和層析應(yīng)該不只使用一次，不要完全寄希望于親和層析一步就能完成分離純化。你的親和層析因?yàn)橹苯佑昧四c激酶切斷了（組氨酸）6親和標(biāo)簽，所以無(wú)法再重復(fù)親和層析了。實(shí)際上，至少第一次用Ni-（組氨酸）6親和層析不要用腸激酶切斷（組氨酸）6親和標(biāo)簽，而用咪唑分濃度梯度把目的蛋白質(zhì)從Ni-柱洗下來(lái)，這樣可以對(duì)洗下來(lái)的樣品多洗幾次，最后再用腸激酶切斷（組氨酸）6親和標(biāo)簽進(jìn)行蛋白質(zhì)分離提純，這樣純度可以高得多。因?yàn)橛媚c激酶切斷（組氨酸）6親和標(biāo)簽進(jìn)行蛋白質(zhì)分離提純是不可逆的，至此也意味著親和層析的結(jié)束。你要是一上來(lái)就用酶切的方法，那么親和層析只用了一次，蛋白質(zhì)純度當(dāng)然高不了。 3.親和層析不是必然的蛋白質(zhì)的分離純化工作的終點(diǎn)。蛋白質(zhì)的親和層析之后也可以再用其他的層析方法和樣品濃縮及凍干方法；必要時(shí)甚至可用電泳（如果能夠保證樣品充分回收和活性恢復(fù)的話(huà)）。 |
2樓2013-06-09 22:01:01
fuding6
木蟲(chóng) (小有名氣)
- 應(yīng)助: 15 (小學(xué)生)
- 金幣: 2939.6
- 帖子: 113
- 在線: 122.3小時(shí)
- 蟲(chóng)號(hào): 985064
- 注冊(cè): 2010-03-29
- 專(zhuān)業(yè): 免疫學(xué)研究新技術(shù)與新方法
3樓2013-06-09 22:50:01
凌波麗
專(zhuān)家顧問(wèn) (知名作家)
-
專(zhuān)家經(jīng)驗(yàn): +218 - MolEPI: 44
- 應(yīng)助: 397 (碩士)
- 貴賓: 0.044
- 金幣: 2118.9
- 散金: 10
- 紅花: 208
- 帖子: 5633
- 在線: 571.6小時(shí)
- 蟲(chóng)號(hào): 1766465
- 注冊(cè): 2012-04-19
- 性別: MM
- 專(zhuān)業(yè): 生物大分子結(jié)構(gòu)與功能
- 管轄: 生物科學(xué)綜合
4樓2013-06-10 01:36:02
| 最具人氣熱帖推薦 [查看全部] | 作者 | 回/看 | 最后發(fā)表 | |
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 086502化學(xué)工程342求調(diào)劑 +4 | 阿姨復(fù)古不過(guò) 2026-03-27 | 4/200 |
|
|---|---|---|---|---|
|
|
[考研] 291求調(diào)劑 +13 | hhhhxn.. 2026-03-23 | 19/950 |
|
|
|
[考研] 295材料工程專(zhuān)碩求調(diào)劑 +6 | 1428151015 2026-03-27 | 6/300 |
|
|
[考研] 083000學(xué)碩274求調(diào)劑 +5 | Li李魚(yú) 2026-03-26 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 085701環(huán)境工程，267求調(diào)劑 +12 | minht 2026-03-26 | 12/600 |
|
|
|
[考研] 086000調(diào)劑 +3 | 7901117076 2026-03-26 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 材料與化工085600，總分304，本科有兩篇sci參與，求調(diào)劑 +10 | 幸運(yùn)的醬醬 2026-03-22 | 12/600 |
|
|
|
[考研] 292求調(diào)劑 +13 | 鵝鵝鵝額額額額?/a> 2026-03-25 | 14/700 |
|
|
|
[考研] 0856調(diào)劑 +5 | 求求讓我有書(shū)讀?/a> 2026-03-26 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 考研調(diào)劑 +10 | 呼呼？~+123456 2026-03-24 | 10/500 |
|
|
|
[考研] 一志愿鄭大085600，310分求調(diào)劑 +5 | 李瀟可 2026-03-26 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 342求調(diào)劑 +3 | 加油a李zs 2026-03-26 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 324求調(diào)劑 +4 | wysyjs25 2026-03-21 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 07化學(xué)303求調(diào)劑 +5 | 睿08 2026-03-25 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 296求調(diào)劑 +4 | 汪��？！ 2026-03-25 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 生物學(xué)學(xué)碩求調(diào)劑 +7 | 小羊睡著了? 2026-03-23 | 10/500 |
|
|
|
[考研] 一志愿武理085500機(jī)械專(zhuān)業(yè)總分300求調(diào)劑 +3 | an10101 2026-03-24 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 調(diào)劑 +4 | 13853210211 2026-03-24 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 一志愿北化315 求調(diào)劑 +3 | akrrain 2026-03-24 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 0703化學(xué)調(diào)劑 +4 | 妮妮ninicgb 2026-03-21 | 4/200 |
|