 |
 |
 |
 |
 |
 |
||
 |
 |
 |
 |
 |
| 5 | 1/1 | 返回列表 |
| 查看: 6268 | 回復(fù): 8 | ||||
| 當(dāng)前只顯示滿足指定條件的回帖，點(diǎn)擊這里查看本話題的所有回帖 | ||||
254131473銅蟲 (初入文壇)
|
[求助]
蛋白質(zhì)結(jié)合金屬離子的結(jié)合位點(diǎn)的確證方法
|
|||
|
1.肌鈣蛋白C和鈣離子結(jié)合位點(diǎn)如何確證？或者類似的金屬離子和蛋白質(zhì)結(jié)合位點(diǎn)的確認(rèn)的方法。 2.檢測出的C-和N-端的肽段序列的變化與結(jié)合位點(diǎn)的關(guān)系。 跪求。。 |
回復(fù)此樓» 收錄本帖的淘帖專輯推薦
 蛋白質(zhì)生物學(xué)實(shí)驗(yàn)經(jīng)驗(yàn) |
» 猜你喜歡
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之小鼠實(shí)驗(yàn)：嚴(yán)謹(jǐn)設(shè)計(jì)，解析生命機(jī)制的重要載體
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之重金屬檢測：精準(zhǔn)篩查，守護(hù)健康與環(huán)境的防線
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
化學(xué)工程及工業(yè)化學(xué)論文潤色/翻譯怎么收費(fèi)?
已經(jīng)有87人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之“蛙測重金屬我背鍋三千”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之“鼠逃三次我發(fā)三篇SCI”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
納米粒度分析
已經(jīng)有3人回復(fù)
-
林科院林化所招收材料與化工專業(yè)碩士，坐標(biāo)南京
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
留學(xué)--博士招生
已經(jīng)有16人回復(fù)
-
化學(xué)工程，本211，求調(diào)劑，ab區(qū)不限
已經(jīng)有4人回復(fù)
-
邵陽學(xué)院食品與化學(xué)工程學(xué)院碩士調(diào)劑
已經(jīng)有0人回復(fù)
» 本主題相關(guān)價值貼推薦，對您同樣有幫助:
- 蛋白質(zhì)糖基化位點(diǎn)鑒定
已經(jīng)有26人回復(fù)
- 蛋白質(zhì)三級結(jié)構(gòu)與底物結(jié)合位點(diǎn)
已經(jīng)有4人回復(fù)
- 請問一下，國內(nèi)有沒有什么單位或者高校做蛋白質(zhì)N-糖基化位點(diǎn)鑒定的
已經(jīng)有7人回復(fù)
凌波麗
專家顧問 (知名作家)
-
專家經(jīng)驗(yàn): +218 - MolEPI: 44
- 應(yīng)助: 397 (碩士)
- 貴賓: 0.044
- 金幣: 2118.9
- 散金: 10
- 紅花: 208
- 帖子: 5633
- 在線: 571.6小時
- 蟲號: 1766465
- 注冊: 2012-04-19
- 性別: MM
- 專業(yè): 生物大分子結(jié)構(gòu)與功能
- 管轄: 生物科學(xué)綜合
3樓2013-06-17 10:52:34
凌波麗
專家顧問 (知名作家)
-
專家經(jīng)驗(yàn): +218 - MolEPI: 44
- 應(yīng)助: 397 (碩士)
- 貴賓: 0.044
- 金幣: 2118.9
- 散金: 10
- 紅花: 208
- 帖子: 5633
- 在線: 571.6小時
- 蟲號: 1766465
- 注冊: 2012-04-19
- 性別: MM
- 專業(yè): 生物大分子結(jié)構(gòu)與功能
- 管轄: 生物科學(xué)綜合
【答案】應(yīng)助回帖
★ ★
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
254131473(myprayer代發(fā)): 金幣+2, 贈人玫瑰，手有余香。期待你的精彩和更詳細(xì)的解答。 2013-06-17 13:56:56
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
254131473(myprayer代發(fā)): 金幣+2, 贈人玫瑰，手有余香。期待你的精彩和更詳細(xì)的解答。 2013-06-17 13:56:56
|
我把你的問題分為三個問題加以討論。 1.肌鈣蛋白C和鈣離子結(jié)合位點(diǎn)如何確證？或者類似的金屬離子和蛋白質(zhì)結(jié)合位點(diǎn)的確認(rèn)的方法。 答：事先要獲得樣品蛋白質(zhì)的全序列（從數(shù)據(jù)庫應(yīng)該容易查到，實(shí)在沒有再測序）。 肌鈣蛋白C一級結(jié)構(gòu)的的氨基酸全序列中可能與金屬離子形成螯合鍵的氨基酸的位點(diǎn)----在一級結(jié)構(gòu)中的位置，判定出結(jié)合有金屬離子形成螯合鍵的氨基酸的具體位點(diǎn)。1.根據(jù)目的蛋白質(zhì)的全序列中可能與金屬離子形成螯合鍵的氨基酸的位點(diǎn)----在一級結(jié)構(gòu)中的位置，判定出結(jié)合有金屬離子形成螯合鍵的氨基酸的具體位點(diǎn)。 2.金屬離子和蛋白質(zhì)結(jié)合位點(diǎn)的確認(rèn)的方法。 答：確定金屬離子和蛋白質(zhì)結(jié)合位點(diǎn)的確認(rèn)的方法。方法很多了，舉例如下： （1）基于NMR的方法。最簡單的方法：可以用NMR解析結(jié)合金屬離子的蛋白質(zhì)的完全的三維結(jié)構(gòu)，要用自選量子數(shù)不為零的同位素加以標(biāo)記。 （2）基于質(zhì)譜的方法。事先要獲得樣品蛋白質(zhì)的全序列（從數(shù)據(jù)庫應(yīng)該容易查到，實(shí)在沒有再測序）；用強(qiáng)的螯合試劑奪取結(jié)合金屬離子的蛋白質(zhì)中的金屬離子，得到脫金屬的蛋白質(zhì)分子，然后用超濾除去螯合試劑和金屬離子，剩下脫金屬的蛋白質(zhì)分子；分別用胰蛋白酶有限水解結(jié)合金屬離子的蛋白質(zhì)和不結(jié)合結(jié)合金屬離子的蛋白質(zhì)，分別過質(zhì)譜，辨別出m/z不一樣的多肽片段（能夠讀出相對分子量）的質(zhì)譜峰；用分子篩層析分離出含有金屬的蛋白質(zhì)分子和脫金屬的蛋白質(zhì)分子質(zhì)譜峰不一樣的多肽片段（能夠讀出相對分子量）；取出以上質(zhì)譜峰不一樣的多肽片段（能夠讀出相對分子量），進(jìn)行測序---------測定一部分知道多肽片段在整個序列中的位置即可，然后用串聯(lián)質(zhì)譜直接對于含有金屬離子的肽片段測序即可判定出結(jié)合有金屬離子形成螯合鍵的氨基酸的具體位點(diǎn)（對比不含金屬的該段的質(zhì)譜即可知道）。 （3）基于X-ray diffraction的方法。用NMR解析結(jié)合金屬離子的蛋白質(zhì)的完全的三維結(jié)構(gòu)，前提是能夠獲得結(jié)合金屬離子的蛋白質(zhì)的單晶體。 （4）基于肽譜分析的方法。事先要獲得樣品蛋白質(zhì)的全序列（從數(shù)據(jù)庫應(yīng)該容易查到，實(shí)在沒有再測序）；用強(qiáng)的螯合試劑奪取結(jié)合金屬離子的蛋白質(zhì)中的金屬離子，得到脫金屬的蛋白質(zhì)分子，然后用超濾除去螯合試劑和金屬離子，剩下脫金屬的蛋白質(zhì)分子；分別用胰蛋白酶有限水解結(jié)合金屬離子的蛋白質(zhì)和不結(jié)合結(jié)合金屬離子的蛋白質(zhì)，分別過電泳，辨別出兩次電泳圖上位點(diǎn)不一樣一樣的多肽片段（能夠讀出相對分子量）的質(zhì)譜峰；挖出位置不一樣的兩側(cè)的電泳圖上的肽斑回收其中肽段；對電泳圖上位點(diǎn)不一樣的多肽片段進(jìn)行測序（Edman降解法即可，Edman降解法本身無法測定修飾的氨基酸，這本身也是一種信息）---------測定一部分知道多肽片段在整個序列中的位置即可，然后根據(jù)目的蛋白質(zhì)的全序列中可能與金屬離子形成螯合鍵的氨基酸的位點(diǎn)----在一級結(jié)構(gòu)中的位置，判定出結(jié)合有金屬離子形成螯合鍵的氨基酸的具體位點(diǎn)。 3.檢測出的C-和N-端的肽段序列的變化與結(jié)合位點(diǎn)的關(guān)系。 答：用C-和N-端的肽段序列的變化后的目的蛋白質(zhì)，用有限水解或者構(gòu)建載體生物合成等獲得。 然后重復(fù)"2"的研究方法。 參考文獻(xiàn)： MMB-173-calcium-binding protein protocols –Vol-2 & Vol-1(free) http://www.gaoyang168.com/bbs/viewthread.php?tid=5940632 個人意見僅供參考！ |
2樓2013-06-17 10:51:13
凌波麗
專家顧問 (知名作家)
-
專家經(jīng)驗(yàn): +218 - MolEPI: 44
- 應(yīng)助: 397 (碩士)
- 貴賓: 0.044
- 金幣: 2118.9
- 散金: 10
- 紅花: 208
- 帖子: 5633
- 在線: 571.6小時
- 蟲號: 1766465
- 注冊: 2012-04-19
- 性別: MM
- 專業(yè): 生物大分子結(jié)構(gòu)與功能
- 管轄: 生物科學(xué)綜合
【答案】應(yīng)助回帖
|
補(bǔ)充五點(diǎn)： 1.如果直接從完整的蛋白質(zhì)中去除螯合的金屬離子，比較困難，可以先進(jìn)行有限酶解，然后根據(jù)事先知道的氨基酸全序列和酶解位點(diǎn)，挑選出可能的螯合的金屬離子的肽片段，用分子篩層析分離，然后侵泡于強(qiáng)的螯合試劑中，去除螯合的金屬離子會比較容易。 2.去除蛋白質(zhì)分子中的螯合的金屬離子的方法也可以通過將對螯合的金屬離子的提供配位鍵的氨基酸的側(cè)鏈加以氧化的方法，而釋放出被螯合的金屬離子 3.我在二樓講的試驗(yàn)方法是通用方法，既不知道金屬離子與蛋白質(zhì)上的哪些氨基酸殘基會有相互作用，也不知道相互作用形成的鍵是什么類型的鍵，甚至不知道結(jié)合了多少金屬離子的情況下使用的通用實(shí)驗(yàn)方法。 4.我在二樓講的試驗(yàn)方法“（4）基于肽譜分析的方法”中的電泳是“雙向電泳”。 5.該實(shí)驗(yàn)方法同樣能夠搬到任何的蛋白質(zhì)被無機(jī)或有機(jī)小分子共價修飾的具體位點(diǎn)的確定的實(shí)驗(yàn)方法上。 |
» 本帖已獲得的紅花（最新10朵）
2541314734樓2013-06-17 22:17:20
254131473
銅蟲 (初入文壇)
- 應(yīng)助: 0 (幼兒園)
- 金幣: 181.5
- 帖子: 6
- 在線: 7.7小時
- 蟲號: 2483280
- 注冊: 2013-05-27
- 性別: GG
- 專業(yè): 食品科學(xué)基礎(chǔ)
5樓2013-06-18 09:33:39
| 最具人氣熱帖推薦 [查看全部] | 作者 | 回/看 | 最后發(fā)表 | |
|---|---|---|---|---|
|
[考研]
 一志愿武漢理工，總分321，英一數(shù)二，求老師收留。
+10
|
nnnnnnn5 2026-03-25 | 10/500 |
|
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 各位老師好，我的一志愿為北京科技大學(xué)085601材料專碩 +8 | Koxui 2026-03-28 | 8/400 |
|
|
|
[考研] 305求調(diào)劑 +8 | RuiFairyrui 2026-03-28 | 8/400 |
|
|
|
[考研] 本科雙非材料，跨考一志愿華電085801電氣，283求調(diào)劑，任何專業(yè)都可以 +6 | 芝士雪baoo 2026-03-28 | 8/400 |
|
|
|
[考研] 11408軟件工程求調(diào)劑 +3 | Qiu學(xué)ing 2026-03-28 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 343求調(diào)劑 +5 | 愛羈絆 2026-03-28 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 283求調(diào)劑 +7 | A child 2026-03-28 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 081200-314 +3 | LILIQQ 2026-03-27 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 考研化學(xué)308分求調(diào)劑 +10 | 你好明天你好 2026-03-23 | 12/600 |
|
|
|
[考研] 化學(xué)308分求調(diào)劑 +8 | 你好明天你好 2026-03-23 | 9/450 |
|
|
|
[考研] 一志愿鄭大085600，310分求調(diào)劑 +5 | 李瀟可 2026-03-26 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 342求調(diào)劑 +3 | 加油a李zs 2026-03-26 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 336材料求調(diào)劑 +7 | 陳瀅瑩 2026-03-26 | 9/450 |
|
|
|
[考研]
 085602化學(xué)工程求調(diào)劑。
+4
|
平樂樂樂 2026-03-26 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 281求調(diào)劑 +6 | Koxui 2026-03-24 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 282求調(diào)劑 +3 | wcq131415 2026-03-24 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 086003食品工程求調(diào)劑 +6 | 淼淼111 2026-03-24 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 340求調(diào)劑 +5 | 話梅糖111 2026-03-24 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 277分求調(diào)劑，跨調(diào)材料 +3 | 考研調(diào)劑lxh 2026-03-24 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 一志愿河北工業(yè)大學(xué)0817化工278分求調(diào)劑 +7 | jhybd 2026-03-23 | 12/600 |
|