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above000銅蟲 (小有名氣)
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關(guān)于細胞計數(shù)板的問題 已有1人參與
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| 請假各位前輩一個問題，為什么資料里的計數(shù)方法跟我們實驗室的計數(shù)方法有出入，資料里是看中間的方格，而我們這是看四周的那四個方格，合理的計數(shù)方法應(yīng)該是怎么樣的？ |
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sxxuan
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2樓2013-06-19 14:10:00
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【答案】應(yīng)助回帖
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
amisking: 回帖置頂 2013-06-19 18:30:35
1949stone: MolEPI+1, ok 2013-06-20 09:14:49
amisking: 回帖置頂 2013-06-19 18:30:35
1949stone: MolEPI+1, ok 2013-06-20 09:14:49
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小蟲子要看好自己的 chamber count blood cell 是什么牌子的，什么標準規(guī)格的，如果和我下面提到你的一樣，你可以參考一下 細胞計數(shù) 實驗原理：當待測細胞懸液中細胞均勻分布時，通過測定一定體積懸液中的細胞的數(shù)目，即可換算出每毫升細胞懸液中細胞的細胞數(shù)目。 具體操作： 一.準備工作： 取一瓶傳代的細胞，按照《傳代細胞培養(yǎng)（消化法）》中的傳代方法繁殖細胞，待長成單層后以被使用。 二.細胞懸液制備： 細胞懸液的制備方法是用0.25％的胰蛋白酶液消化、PBS液洗滌后，加入培養(yǎng)液（或Hanks液或PBS等平衡鹽溶液），吹打制成待測細胞懸液。 三.細胞計數(shù)： 1.蓋好蓋玻片：取一套血球計數(shù)板，將特制的蓋玻片蓋在血球計數(shù)槽上。 2.制備計數(shù)用的細胞懸液：用吸管吸5滴細胞懸液到一離心管中，加入5滴臺盼藍染液（0.4％）或苯胺黑，活細胞不會被染色，加入染液后就可以在顯微鏡下區(qū)別活細胞和死細胞。 3.將細胞懸液滴入計數(shù)板：將待測細胞懸液吹均勻，然后吸取少量懸液沿蓋片邊緣緩緩滴入，要保證蓋片下充滿懸液，注意蓋片下不要有氣泡，也不能讓懸液流入旁邊槽中。 4.統(tǒng)計四個大格的細胞數(shù)：將血球計數(shù)板放于顯微鏡的低倍鏡下觀察，并移動計數(shù)板，當看到鏡中出現(xiàn)計數(shù)方格后，數(shù)出四角的四個大鉻（每個大格含有16個中鉻）中沒有被染液染上色的細胞數(shù)目。 5.計算原細胞懸液的細胞數(shù):按照下面公式計算細胞密度： （細胞懸液的細胞數(shù)）/ml＝ （ 四個大格子細胞數(shù)/4) ×2×104 說明：公式中除以4因為計數(shù)了4個大格的細胞數(shù)。 公式中乘以2因為細胞懸液于染液是1：1稀釋。 公式中乘以104因為計數(shù)板中每一個大格的體積為： 1.0mm（長）×1.0mm（寬）×0.1mm（高）＝0.1mm3 而 1ml＝1000mm3 四.細胞計數(shù)要點： 1.進行細胞計數(shù)時，要求懸液中細胞數(shù)目不低于104個/ml，如果細胞數(shù)目很少要進行離心再懸浮于少量培養(yǎng)液中； 2.要求細胞懸液中的細胞分散良好，否則影響計數(shù)準確性。 3.取樣計數(shù)前，應(yīng)充分混勻細胞懸液，尤其時多次取樣計數(shù)時更要注意每次取樣都要混勻，以求計數(shù)準確； 4. 數(shù)細胞的原則是只數(shù)完整的細胞，若細胞聚集成團時，只按照一個細胞計算。如果細胞壓在格線上時，則只計上線，不計下線，只計右線，不計左線。 5. 操作時，注意蓋片下不能有氣泡，也不能讓懸液流入旁邊槽中，否則要重新計數(shù)。 五.初學者易犯的錯誤： 1. 計數(shù)前未將待測懸液吹打均勻。 2. 滴入細胞懸液時蓋玻片下出現(xiàn)氣泡。 3. 滴入懸液時的量太多，至使細胞懸液流入旁邊的槽中。 期待你的好結(jié)果 |
3樓2013-06-19 17:13:41
xiangyu9356
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4樓2013-06-20 09:20:02
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5樓2013-06-20 19:10:33
【答案】應(yīng)助回帖
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兩種方法都是可行的，中間和四角都可以作為計數(shù)區(qū)域。中間的計數(shù)室跟四個角的大格一般大。只要注意計算公時，最后取平均值時，計算到到每個大格面積內(nèi)（1mm×1mm×0.1mm）的細胞個數(shù)即可。然后×10000×稀釋倍數(shù)，得到樣品每ml細胞數(shù)。另外，也有人提到我們要盡量保證數(shù)出來的細胞總數(shù)要大于100個，但是也不可以太多，否則結(jié)果容易出現(xiàn)誤差，因此在進行細胞計數(shù)時可以根據(jù)細胞密度來確定計數(shù)的方格總數(shù)。也就是說，濃度比較低時可以數(shù)四個角，濃度很高時，可以數(shù)中間。 |
6樓2014-12-10 09:59:07
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