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above000銅蟲 (小有名氣)
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關(guān)于細(xì)胞計(jì)數(shù)板的問題 已有1人參與
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| 請假各位前輩一個(gè)問題，為什么資料里的計(jì)數(shù)方法跟我們實(shí)驗(yàn)室的計(jì)數(shù)方法有出入，資料里是看中間的方格，而我們這是看四周的那四個(gè)方格，合理的計(jì)數(shù)方法應(yīng)該是怎么樣的？ |
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xiangyu9356
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【答案】應(yīng)助回帖
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
amisking: 回帖置頂 2013-06-19 18:30:35
1949stone: MolEPI+1, ok 2013-06-20 09:14:49
amisking: 回帖置頂 2013-06-19 18:30:35
1949stone: MolEPI+1, ok 2013-06-20 09:14:49
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小蟲子要看好自己的 chamber count blood cell 是什么牌子的，什么標(biāo)準(zhǔn)規(guī)格的，如果和我下面提到你的一樣，你可以參考一下 細(xì)胞計(jì)數(shù) 實(shí)驗(yàn)原理：當(dāng)待測細(xì)胞懸液中細(xì)胞均勻分布時(shí)，通過測定一定體積懸液中的細(xì)胞的數(shù)目，即可換算出每毫升細(xì)胞懸液中細(xì)胞的細(xì)胞數(shù)目。 具體操作： 一.準(zhǔn)備工作： 取一瓶傳代的細(xì)胞，按照《傳代細(xì)胞培養(yǎng)（消化法）》中的傳代方法繁殖細(xì)胞，待長成單層后以被使用。 二.細(xì)胞懸液制備： 細(xì)胞懸液的制備方法是用0.25％的胰蛋白酶液消化、PBS液洗滌后，加入培養(yǎng)液（或Hanks液或PBS等平衡鹽溶液），吹打制成待測細(xì)胞懸液。 三.細(xì)胞計(jì)數(shù)： 1.蓋好蓋玻片：取一套血球計(jì)數(shù)板，將特制的蓋玻片蓋在血球計(jì)數(shù)槽上。 2.制備計(jì)數(shù)用的細(xì)胞懸液：用吸管吸5滴細(xì)胞懸液到一離心管中，加入5滴臺盼藍(lán)染液（0.4％）或苯胺黑，活細(xì)胞不會被染色，加入染液后就可以在顯微鏡下區(qū)別活細(xì)胞和死細(xì)胞。 3.將細(xì)胞懸液滴入計(jì)數(shù)板：將待測細(xì)胞懸液吹均勻，然后吸取少量懸液沿蓋片邊緣緩緩滴入，要保證蓋片下充滿懸液，注意蓋片下不要有氣泡，也不能讓懸液流入旁邊槽中。 4.統(tǒng)計(jì)四個(gè)大格的細(xì)胞數(shù)：將血球計(jì)數(shù)板放于顯微鏡的低倍鏡下觀察，并移動計(jì)數(shù)板，當(dāng)看到鏡中出現(xiàn)計(jì)數(shù)方格后，數(shù)出四角的四個(gè)大鉻（每個(gè)大格含有16個(gè)中鉻）中沒有被染液染上色的細(xì)胞數(shù)目。 5.計(jì)算原細(xì)胞懸液的細(xì)胞數(shù):按照下面公式計(jì)算細(xì)胞密度： （細(xì)胞懸液的細(xì)胞數(shù)）/ml＝ （ 四個(gè)大格子細(xì)胞數(shù)/4) ×2×104 說明：公式中除以4因?yàn)橛?jì)數(shù)了4個(gè)大格的細(xì)胞數(shù)。 公式中乘以2因?yàn)榧?xì)胞懸液于染液是1：1稀釋。 公式中乘以104因?yàn)橛?jì)數(shù)板中每一個(gè)大格的體積為： 1.0mm（長）×1.0mm（寬）×0.1mm（高）＝0.1mm3 而 1ml＝1000mm3 四.細(xì)胞計(jì)數(shù)要點(diǎn)： 1.進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)時(shí)，要求懸液中細(xì)胞數(shù)目不低于104個(gè)/ml，如果細(xì)胞數(shù)目很少要進(jìn)行離心再懸浮于少量培養(yǎng)液中； 2.要求細(xì)胞懸液中的細(xì)胞分散良好，否則影響計(jì)數(shù)準(zhǔn)確性。 3.取樣計(jì)數(shù)前，應(yīng)充分混勻細(xì)胞懸液，尤其時(shí)多次取樣計(jì)數(shù)時(shí)更要注意每次取樣都要混勻，以求計(jì)數(shù)準(zhǔn)確； 4. 數(shù)細(xì)胞的原則是只數(shù)完整的細(xì)胞，若細(xì)胞聚集成團(tuán)時(shí)，只按照一個(gè)細(xì)胞計(jì)算。如果細(xì)胞壓在格線上時(shí)，則只計(jì)上線，不計(jì)下線，只計(jì)右線，不計(jì)左線。 5. 操作時(shí)，注意蓋片下不能有氣泡，也不能讓懸液流入旁邊槽中，否則要重新計(jì)數(shù)。 五.初學(xué)者易犯的錯誤： 1. 計(jì)數(shù)前未將待測懸液吹打均勻。 2. 滴入細(xì)胞懸液時(shí)蓋玻片下出現(xiàn)氣泡。 3. 滴入懸液時(shí)的量太多，至使細(xì)胞懸液流入旁邊的槽中。 期待你的好結(jié)果 |
3樓2013-06-19 17:13:41
above000
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