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小木蟲論壇-學術科研互動平臺 » 生物醫(yī)藥區(qū) » 分子生物 » 綜合其他 » 關于細胞計數板的問題
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above000銅蟲 (小有名氣)
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關于細胞計數板的問題 已有1人參與
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| 請假各位前輩一個問題，為什么資料里的計數方法跟我們實驗室的計數方法有出入，資料里是看中間的方格，而我們這是看四周的那四個方格，合理的計數方法應該是怎么樣的？ |
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above000
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5樓2013-06-20 19:10:33
sxxuan
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2樓2013-06-19 14:10:00
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amisking: 回帖置頂 2013-06-19 18:30:35
1949stone: MolEPI+1, ok 2013-06-20 09:14:49
amisking: 回帖置頂 2013-06-19 18:30:35
1949stone: MolEPI+1, ok 2013-06-20 09:14:49
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小蟲子要看好自己的 chamber count blood cell 是什么牌子的，什么標準規(guī)格的，如果和我下面提到你的一樣，你可以參考一下 細胞計數 實驗原理：當待測細胞懸液中細胞均勻分布時，通過測定一定體積懸液中的細胞的數目，即可換算出每毫升細胞懸液中細胞的細胞數目。 具體操作： 一.準備工作： 取一瓶傳代的細胞，按照《傳代細胞培養(yǎng)（消化法）》中的傳代方法繁殖細胞，待長成單層后以被使用。 二.細胞懸液制備： 細胞懸液的制備方法是用0.25％的胰蛋白酶液消化、PBS液洗滌后，加入培養(yǎng)液（或Hanks液或PBS等平衡鹽溶液），吹打制成待測細胞懸液。 三.細胞計數： 1.蓋好蓋玻片：取一套血球計數板，將特制的蓋玻片蓋在血球計數槽上。 2.制備計數用的細胞懸液：用吸管吸5滴細胞懸液到一離心管中，加入5滴臺盼藍染液（0.4％）或苯胺黑，活細胞不會被染色，加入染液后就可以在顯微鏡下區(qū)別活細胞和死細胞。 3.將細胞懸液滴入計數板：將待測細胞懸液吹均勻，然后吸取少量懸液沿蓋片邊緣緩緩滴入，要保證蓋片下充滿懸液，注意蓋片下不要有氣泡，也不能讓懸液流入旁邊槽中。 4.統計四個大格的細胞數：將血球計數板放于顯微鏡的低倍鏡下觀察，并移動計數板，當看到鏡中出現計數方格后，數出四角的四個大鉻（每個大格含有16個中鉻）中沒有被染液染上色的細胞數目。 5.計算原細胞懸液的細胞數:按照下面公式計算細胞密度： （細胞懸液的細胞數）/ml＝ （ 四個大格子細胞數/4) ×2×104 說明：公式中除以4因為計數了4個大格的細胞數。 公式中乘以2因為細胞懸液于染液是1：1稀釋。 公式中乘以104因為計數板中每一個大格的體積為： 1.0mm（長）×1.0mm（寬）×0.1mm（高）＝0.1mm3 而 1ml＝1000mm3 四.細胞計數要點： 1.進行細胞計數時，要求懸液中細胞數目不低于104個/ml，如果細胞數目很少要進行離心再懸浮于少量培養(yǎng)液中； 2.要求細胞懸液中的細胞分散良好，否則影響計數準確性。 3.取樣計數前，應充分混勻細胞懸液，尤其時多次取樣計數時更要注意每次取樣都要混勻，以求計數準確； 4. 數細胞的原則是只數完整的細胞，若細胞聚集成團時，只按照一個細胞計算。如果細胞壓在格線上時，則只計上線，不計下線，只計右線，不計左線。 5. 操作時，注意蓋片下不能有氣泡，也不能讓懸液流入旁邊槽中，否則要重新計數。 五.初學者易犯的錯誤： 1. 計數前未將待測懸液吹打均勻。 2. 滴入細胞懸液時蓋玻片下出現氣泡。 3. 滴入懸液時的量太多，至使細胞懸液流入旁邊的槽中。 期待你的好結果 |
3樓2013-06-19 17:13:41
xiangyu9356
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4樓2013-06-20 09:20:02
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