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melisax新蟲(chóng) (初入文壇)
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[求助]
T4酶切連接求助！
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最近在做酶切連接，我用的載體上的多克隆位點(diǎn)，SALI和HIND3酶切切開(kāi)之后與目的片段連接，目的片段也是用同樣的酶從T載上切下來(lái)的，載體和片段都做了膠回收也跑過(guò)膠看過(guò)亮度了，濃度還可以的，然后按1比10體系加，T4連接過(guò)夜。我做了好久了平板上一點(diǎn)也不長(zhǎng)。確認(rèn)酶什么的都是沒(méi)有問(wèn)題的別人做都很正常，感受態(tài)我也換過(guò)幾次也不長(zhǎng)，用商業(yè)化的感受態(tài)也不長(zhǎng)，平板抗生素也都是沒(méi)有問(wèn)題的�，F(xiàn)在抓狂了，到底問(wèn)題出在哪里都不知道，求大神解答！謝謝！��！ [ 發(fā)自手機(jī)版 http://www.gaoyang168.com/3g ] |
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melisax
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2樓2013-06-19 23:50:35
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【答案】應(yīng)助回帖
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感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
melisax(myprayer代發(fā)): 金幣+1, Gifts of roses, hand there are lingering fragrance. Look forward to your wonderful and more detailed answer. 2013-06-20 09:06:26
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| 轉(zhuǎn)化時(shí)要多做點(diǎn)對(duì)照便于分析。關(guān)于T4連接酶的對(duì)照，一般有載體雙酶切自連、單酶切自連的對(duì)照。感受態(tài)的對(duì)照最好也做一下，就是轉(zhuǎn)個(gè)同樣抗性的質(zhì)粒，確定轉(zhuǎn)化步驟和操作沒(méi)有問(wèn)題。 |
3樓2013-06-20 00:47:38
Fleaves
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10樓2013-06-22 00:11:20
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