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dingxinag木蟲(chóng) (小有名氣)
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蛋白質(zhì)濃度檢測(cè)
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| 最近在做一個(gè)蛋白質(zhì)和細(xì)胞相互作用的實(shí)驗(yàn)，但是沒(méi)法檢測(cè)作用如何，想來(lái)想去只能通過(guò)測(cè)定PBS中剩余蛋白質(zhì)的量來(lái)確定蛋白質(zhì)的消耗量。但是有一個(gè)問(wèn)題，本人非生物的，不知道什么方法精確，在論壇里搜了一下，各種方法都有人用，也看不太懂，有沒(méi)有哪位高手能幫一下啊，我用的蛋白質(zhì)濃度是 50 ug/ml in PBS，用什么方法能精確測(cè)出剩余的蛋白質(zhì)濃度呢? 謝謝謝謝 |
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2樓2013-06-27 15:40:59
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4樓2013-06-27 15:50:55
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http://www.beyotime.com/bca.htm 應(yīng)該是沒(méi)問(wèn)題的~~ QQ截圖20130627153047.png |
5樓2013-06-27 15:52:45
凌波麗
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測(cè)定一下蛋白質(zhì)的濃度不就行了。比如：Bradford法 http://zhidao.baidu.com/question/322367292.html 考馬斯亮藍(lán)法（Bradford法）測(cè)定蛋白質(zhì)濃度1、試劑：（1）考馬斯亮藍(lán)試劑：考馬斯亮藍(lán)G—250 100mg溶于50ml 95%乙醇，加入100ml 85% H3PO4，用蒸餾水稀釋至1000ml, 濾紙過(guò)濾。最終試劑中含0.01%（W/V）考馬斯亮藍(lán)G—250, 4.7%（W/V）乙醇，8.5%（W/V）H3PO4。（2）標(biāo)準(zhǔn)蛋白質(zhì)溶液：純的牛血清血蛋白，根據(jù)其純度同0.15mol/L NaCl配制成100 ug/ml蛋白溶液。2. 器材： （1）可見(jiàn)光分光光度計(jì) （2）旋渦混合器 3、標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)的制作 試管編號(hào) 0 1 2 3 4 5 6100ug/ml標(biāo)準(zhǔn)蛋白（ml） 0.0 0.1 0.2 0.3 0.4 0.5 0.60.15mol/L NaCl （ml） 1 0.9 0.8 0.7 0.6 0.5 0.4考馬斯亮藍(lán)試劑 （ml） 5 5 5 5 5 5 5搖勻，1h內(nèi)以0號(hào)管為空白對(duì)照,在595nm處比色 以A595nm為縱坐標(biāo)，標(biāo)準(zhǔn)蛋白含量為橫坐標(biāo)（六個(gè)點(diǎn)為10ug、20 ug、30 ug、40 ug、50 ug、60 ug），在坐標(biāo)軸上繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)。4、樣品中蛋白質(zhì)含量的測(cè)定 另取兩支干凈的試管（做一重復(fù)），加入合適濃度的待測(cè)樣品，使其測(cè)定值在標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)的范圍內(nèi)，測(cè)定方法同上，由樣品液的吸光度查標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)即可求出含量。注意事項(xiàng)：1、 如果要求嚴(yán)格，最好在試劑加入后的5~20min內(nèi)測(cè)定光 吸收，因?yàn)檫@段時(shí)間內(nèi)顏色是最穩(wěn)定的。2、 若選擇在旋渦混合器上混合，注意不要太劇烈，以免產(chǎn)生大量氣泡而難于消除。 |
6樓2013-06-28 00:08:34
凌波麗
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1949stone: 我以前一個(gè)公司用過(guò)“鹽酸胍法” 很快 2013-06-28 12:59:49
7樓2013-06-28 00:09:33
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1949stone: 金幣+1, 還是很認(rèn)真負(fù)責(zé)的態(tài)度 2013-06-28 13:00:09
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http://blog.163.com/mzy_l/blog/static/2824467520071014150280/ 我引用的網(wǎng)上材料，我都是至少大致看過(guò)，認(rèn)為至少?zèng)]有明顯錯(cuò)誤和可操作才貼上來(lái)的！ |
8樓2013-06-28 00:12:59
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