 |
 |
 |
 |
 |
 |
||
 |
 |
 |
 |
 |
| 查看: 3089 | 回復: 12 | ||
loveiron新蟲 (初入文壇)
|
[求助]
面團中自由巰基含量測定
|
|
|
我要測定面團當中的自由巰基含量。用的Ellman方法（蛋白質(zhì)提取后加入DTNB顯色反應(yīng)，測412nm吸光度）。 這是我的操作。 按照國標方法清洗面筋，然后冷凍干燥，磨粉過篩后制備得到面筋蛋白粉末。 用10ml 8M尿素-Tris/Hcl溶液 溶解0.1g面筋，磁力攪拌1h。 10000g離心10min，取上清液1 ml 加入4ml 8M尿素-Tris/Hcl，100ul 4mg/ml DTNB. 然后就沒有顏色反應(yīng)。 面筋蛋白溶液加巰基乙醇和鹽酸胍處理之后，用三氯乙酸沉淀蛋白，結(jié)果鹽酸胍晶體析出，導致后來不加鹽酸胍了（這個問題又是鬧哪樣！）。沉淀后的蛋白質(zhì)用8M尿素溶解加DTNB有顏色反應(yīng)，說明方法沒問題，二硫鍵也存在的好好地。 問題出在哪里呢？我用半胱氨酸溶液和DTNB反應(yīng)，有顏色反應(yīng)，說明DTNB沒問題。自由巰基容易被氧化，是在制備面筋蛋白的過程中被氧化了？還是有其他什么原因呢。我看很多中文文章都測過，很容易的樣子，可是我一直沒搞定。 |
回復此樓» 猜你喜歡
0832食品調(diào)劑推薦
已經(jīng)有0人回復
-
食品調(diào)劑-總分291-有中核論文導師一作、本人二作-一志愿南昌大學學碩-介紹詳細
已經(jīng)有12人回復
-
食品科學論文潤色/翻譯怎么收費?
已經(jīng)有216人回復
-
法國里爾大學_INRAE 2026招收食品方向CSC博士生
已經(jīng)有0人回復
-
331求調(diào)劑，一志愿合工大食品工程（086003）
已經(jīng)有2人回復
-
303分一志愿江南大學發(fā)酵工程學碩本科參加競賽有實驗室經(jīng)歷有酒廠質(zhì)檢員工作經(jīng)歷
已經(jīng)有5人回復
-
331食品工程求調(diào)劑
已經(jīng)有1人回復
-
一志愿福建農(nóng)林大學 09 食品與營養(yǎng) 初試323
已經(jīng)有0人回復
-
08600生物與醫(yī)藥調(diào)劑，其他方向也可以
已經(jīng)有1人回復
-
鈣離子的存在形式
已經(jīng)有0人回復
» 本主題相關(guān)價值貼推薦，對您同樣有幫助:
- 求助大神，結(jié)合蛋白質(zhì)理論，論述面包制作過程所利用蛋白質(zhì)的性質(zhì)。。
已經(jīng)有3人回復
- 蛋白中巰基和二硫鍵的測定
已經(jīng)有13人回復
- 鹽酸胍含量檢測
已經(jīng)有10人回復
- 蛋白質(zhì)巰基的測定問題
已經(jīng)有14人回復
- 用三氯乙酸沉淀后的蛋白質(zhì)，等電點會發(fā)生變化嗎
已經(jīng)有7人回復
- 流變儀能不能測面團
已經(jīng)有10人回復
- 面團方面的問題
已經(jīng)有6人回復
- 半胱氨酸上的巰基氧化
已經(jīng)有9人回復
- 測定自由基含量
已經(jīng)有5人回復
- 巰基與羥基的自由基加成反應(yīng)活性
已經(jīng)有4人回復
- 自由基檢測的顯色試劑
已經(jīng)有9人回復
- 【求助/交流】關(guān)于含巰基多肽
已經(jīng)有6人回復
煜，莫煩惱
木蟲 (著名寫手)
蟲蛹
- 應(yīng)助: 37 (小學生)
- 金幣: 13489.7
- 散金: 22
- 紅花: 7
- 帖子: 1133
- 在線: 267小時
- 蟲號: 966097
- 注冊: 2010-03-09
- 性別: GG
- 專業(yè): 食品科學基礎(chǔ)
4樓2013-06-29 21:52:56
煜，莫煩惱
木蟲 (著名寫手)
蟲蛹
- 應(yīng)助: 37 (小學生)
- 金幣: 13489.7
- 散金: 22
- 紅花: 7
- 帖子: 1133
- 在線: 267小時
- 蟲號: 966097
- 注冊: 2010-03-09
- 性別: GG
- 專業(yè): 食品科學基礎(chǔ)
2樓2013-06-28 20:46:38
loveiron
新蟲 (初入文壇)
- 應(yīng)助: 0 (幼兒園)
- 金幣: 130
- 帖子: 16
- 在線: 12.9小時
- 蟲號: 1588834
- 注冊: 2012-01-28
- 專業(yè): 食品加工技術(shù)
3樓2013-06-29 19:28:32
loveiron
新蟲 (初入文壇)
- 應(yīng)助: 0 (幼兒園)
- 金幣: 130
- 帖子: 16
- 在線: 12.9小時
- 蟲號: 1588834
- 注冊: 2012-01-28
- 專業(yè): 食品加工技術(shù)
5樓2013-07-02 10:23:53
liujoffe
新蟲 (初入文壇)
- 應(yīng)助: 0 (幼兒園)
- 金幣: 2.5
- 帖子: 1
- 在線: 38分鐘
- 蟲號: 3582437
- 注冊: 2014-12-08
- 專業(yè): 食品加工技術(shù)
6樓2015-04-09 10:53:31
1012203014
金蟲 (正式寫手)
- 應(yīng)助: 9 (幼兒園)
- 金幣: 334.1
- 散金: 31
- 紅花: 3
- 帖子: 395
- 在線: 232.6小時
- 蟲號: 1349300
- 注冊: 2011-07-18
- 性別: GG
- 專業(yè): 化學反應(yīng)工程
|
測定總巰基含量時，15 mg蛋白樣品溶解于5 mL含8 M 尿素的Tris-Gly 緩沖液（0.086 M Tris, 0.09 M Gly 和 0.04 M EDTA, pH 8.0）。測定自由巰基含量時，15 mg樣品溶解于5 mL不含尿素的上述Tris-Gly 緩沖液中，而后加入50 μL Ellman 試劑 （DTNB, 即5,5-二硫基雙2-硝基苯甲酸溶于Tris-Gly 緩沖液，4 mg/mL），在25℃條件下保溫反應(yīng)60 min, 離心（5000 g, 15 min），上清液在412 nm 處測定吸光值，以含Ellman 試劑的Tris-Gly 緩沖液為空白對照。 巰基含量的計算公式如下： SH (μmol/g) = 73.53×A ×D/C 式中：A —除去試劑空白后樣品的吸光度值 D—稀釋倍數(shù) C—樣品濃度（mg/mL） 問題1：上述公式中稀釋倍數(shù)D是怎么算的（具體的式子），如果完全按照上述方法是不是就是1？ 問題2：我測的物質(zhì)為毛發(fā)固體樣品，二硫鍵含量在350μmol/g附近，此種測試方法是否具有可行性 問題3：由于毛發(fā)樣品中含有非水溶性蛋白，又沒喲測量二硫鍵含量的更好的方法 |
7樓2015-09-29 09:06:59
1012203014
金蟲 (正式寫手)
- 應(yīng)助: 9 (幼兒園)
- 金幣: 334.1
- 散金: 31
- 紅花: 3
- 帖子: 395
- 在線: 232.6小時
- 蟲號: 1349300
- 注冊: 2011-07-18
- 性別: GG
- 專業(yè): 化學反應(yīng)工程
|
測定總巰基含量時，15 mg蛋白樣品溶解于5 mL含8 M 尿素的Tris-Gly 緩沖液（0.086 M Tris, 0.09 M Gly 和 0.04 M EDTA, pH 8.0）。測定自由巰基含量時，15 mg樣品溶解于5 mL不含尿素的上述Tris-Gly 緩沖液中，而后加入50 μL Ellman 試劑 （DTNB, 即5,5-二硫基雙2-硝基苯甲酸溶于Tris-Gly 緩沖液，4 mg/mL），在25℃條件下保溫反應(yīng)60 min, 離心（5000 g, 15 min），上清液在412 nm 處測定吸光值，以含Ellman 試劑的Tris-Gly 緩沖液為空白對照。 巰基含量的計算公式如下： SH (μmol/g) = 73.53×A ×D/C 式中：A —除去試劑空白后樣品的吸光度值 D—稀釋倍數(shù) C—樣品濃度（mg/mL） 問題1：上述公式中稀釋倍數(shù)D是怎么算的（具體的式子），如果完全按照上述方法是不是就是1？ 問題2：我測的物質(zhì)為毛發(fā)固體樣品，二硫鍵含量在350μmol/g附近，此種測試方法是否具有可行性 問題3：由于毛發(fā)樣品中含有非水溶性蛋白，又沒喲測量二硫鍵含量的更好的方法 |
8樓2015-09-29 09:07:14
1012203014
金蟲 (正式寫手)
- 應(yīng)助: 9 (幼兒園)
- 金幣: 334.1
- 散金: 31
- 紅花: 3
- 帖子: 395
- 在線: 232.6小時
- 蟲號: 1349300
- 注冊: 2011-07-18
- 性別: GG
- 專業(yè): 化學反應(yīng)工程
|
測定總巰基含量時，15 mg蛋白樣品溶解于5 mL含8 M 尿素的Tris-Gly 緩沖液（0.086 M Tris, 0.09 M Gly 和 0.04 M EDTA, pH 8.0）。測定自由巰基含量時，15 mg樣品溶解于5 mL不含尿素的上述Tris-Gly 緩沖液中，而后加入50 μL Ellman 試劑 （DTNB, 即5,5-二硫基雙2-硝基苯甲酸溶于Tris-Gly 緩沖液，4 mg/mL），在25℃條件下保溫反應(yīng)60 min, 離心（5000 g, 15 min），上清液在412 nm 處測定吸光值，以含Ellman 試劑的Tris-Gly 緩沖液為空白對照。 巰基含量的計算公式如下： SH (μmol/g) = 73.53×A ×D/C 式中：A —除去試劑空白后樣品的吸光度值 D—稀釋倍數(shù) C—樣品濃度（mg/mL） 問題1：上述公式中稀釋倍數(shù)D是怎么算的（具體的式子），如果完全按照上述方法是不是就是1？ 問題2：我測的物質(zhì)為毛發(fā)固體樣品，二硫鍵含量在350μmol/g附近，此種測試方法是否具有可行性 問題3：由于毛發(fā)樣品中含有非水溶性蛋白，又沒喲測量二硫鍵含量的更好的方法 |
9樓2015-09-29 09:07:42
1012203014
金蟲 (正式寫手)
- 應(yīng)助: 9 (幼兒園)
- 金幣: 334.1
- 散金: 31
- 紅花: 3
- 帖子: 395
- 在線: 232.6小時
- 蟲號: 1349300
- 注冊: 2011-07-18
- 性別: GG
- 專業(yè): 化學反應(yīng)工程
|
測定總巰基含量時，15 mg蛋白樣品溶解于5 mL含8 M 尿素的Tris-Gly 緩沖液（0.086 M Tris, 0.09 M Gly 和 0.04 M EDTA, pH 8.0）。測定自由巰基含量時，15 mg樣品溶解于5 mL不含尿素的上述Tris-Gly 緩沖液中，而后加入50 μL Ellman 試劑 （DTNB, 即5,5-二硫基雙2-硝基苯甲酸溶于Tris-Gly 緩沖液，4 mg/mL），在25℃條件下保溫反應(yīng)60 min, 離心（5000 g, 15 min），上清液在412 nm 處測定吸光值，以含Ellman 試劑的Tris-Gly 緩沖液為空白對照。 巰基含量的計算公式如下： SH (μmol/g) = 73.53×A ×D/C 式中：A —除去試劑空白后樣品的吸光度值 D—稀釋倍數(shù) C—樣品濃度（mg/mL） 問題1：上述公式中稀釋倍數(shù)D是怎么算的（具體的式子），如果完全按照上述方法是不是就是1？ 問題2：我測的物質(zhì)為毛發(fā)固體樣品，二硫鍵含量在350μmol/g附近，此種測試方法是否具有可行性 問題3：由于毛發(fā)樣品中含有非水溶性蛋白，又沒喲測量二硫鍵含量的更好的方法 |
10樓2015-09-29 09:17:40
相關(guān)版塊跳轉(zhuǎn)
我要訂閱樓主 loveiron 的主題更新
| 最具人氣熱帖推薦 [查看全部] | 作者 | 回/看 | 最后發(fā)表 | |
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 346求調(diào)劑[0856] +4 | WayneLim327 2026-03-16 | 7/350 |
|
|---|---|---|---|---|
|
|
[考研] 08工科 320總分 求調(diào)劑 +6 | 梨花珞晚風 2026-03-17 | 6/300 |
|
|
[考研] 307求調(diào)劑 +10 | 冷笙123 2026-03-17 | 10/500 |
|
|
|
[考研] 華東師范大學-071000生物學-293分-求調(diào)劑 +3 | 研究生何瑤明 2026-03-18 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 一志愿華中科技大學，080502，354分求調(diào)劑 +5 | 守候夕陽CF 2026-03-18 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 一志愿華南師大 070300（化學）304分求調(diào)劑 +3 | 0703武芊慧雪304 2026-03-18 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 308求調(diào)劑 +3 | 阿姐阿姐家啊 2026-03-18 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 321求調(diào)劑 +9 | 何潤采123 2026-03-18 | 11/550 |
|
|
|
[考研] 304求調(diào)劑 +7 | 司空. 2026-03-18 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 藥學383 求調(diào)劑 +3 | 藥學chy 2026-03-15 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 求調(diào)劑 +3 | eation27 2026-03-20 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 266求調(diào)劑 +5 | 陽陽哇塞 2026-03-14 | 10/500 |
|
|
|
[考研] 0703化學調(diào)劑 +5 | pupcoco 2026-03-17 | 8/400 |
|
|
|
[考研] 277調(diào)劑 +5 | 自由煎餅果子 2026-03-16 | 6/300 |
|
|
|
[碩博家園] 湖北工業(yè)大學 生命科學與健康學院-課題組招收2026級食品/生物方向碩士 +3 | 1喜春8 2026-03-17 | 5/250 |
|
|
|
[論文投稿] 有沒有大佬發(fā)小論文能帶我個二作 +3 | 增銳漏人 2026-03-17 | 4/200 |
|
|
|
[考研]
 11408 一志愿西電，277分求調(diào)劑
+3
|
zhouzhen654 2026-03-16 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 304求調(diào)劑 +4 | ahbd 2026-03-14 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 085601材料工程315分求調(diào)劑 +3 | yang_0104 2026-03-15 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 288求調(diào)劑 +4 | 奇點0314 2026-03-14 | 4/200 |
|