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用三氯乙酸沉淀后的蛋白質(zhì)，等電點(diǎn)會發(fā)生變化嗎 已有1人參與
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| 如題，三氯乙酸沉淀后的蛋白質(zhì)等電點(diǎn)會發(fā)生變化嗎 |
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Davidzjy
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【答案】應(yīng)助回帖
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感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
八寶粥的(kx444555代發(fā)): 金幣+4, 鼓勵交流 2014-01-11 10:40:23
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八寶粥的(kx444555代發(fā)): 金幣+4, 鼓勵交流 2014-01-11 10:40:23
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原文標(biāo)題《三氯乙酸對蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)穩(wěn)定性的影響》 摘錄： TCA 與蛋白質(zhì)之間主要有以下幾個方面的作用： ① 在酸性條件下與蛋白質(zhì)形成不溶性鹽； ② 作為蛋白質(zhì)變性劑使蛋白質(zhì)構(gòu)象發(fā)生改變，暴露出較多的疏水性基團(tuán), 使之聚集沉淀； ③ 隨著蛋白質(zhì)分子量的增大，其結(jié)構(gòu)復(fù)雜性與致密性越大，TCA 可能滲入分子內(nèi)部而使之較難被完全除去，在電泳前樣品加熱處理時可能使蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)發(fā)生酸水解而形成碎片，而且隨時間的延長這一作用愈加明顯； ④ 電泳圖譜顯示，BSA 、HSA 單體譜帶有較明顯的展寬現(xiàn)象，這可能是由于TCA 的結(jié)合，使SDS 與蛋白質(zhì)的結(jié)合量產(chǎn)生偏差，從而造成蛋白質(zhì)所帶電荷的不均一性，造成遷移率的不一致。 我們認(rèn)為在電泳時使用TCA 對蛋白質(zhì)樣品的濃縮或除鹽時，對于分子質(zhì)量大的蛋白質(zhì)，要慎重選擇TCA。 對小分子量蛋白質(zhì)的濃縮，采用TCA 時也有兩點(diǎn)需要注意：一是用TCA 沉淀后， 盡量用丙酮徹底抽提TCA；二是樣品處理后要盡快進(jìn)行電泳分析，以免發(fā)生聚集及斷裂， 造成結(jié)果分析的不準(zhǔn)確。 ———————————————————————————— 摘自《第四軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報》2001; 22 (22) |
2樓2014-01-11 09:12:42
3樓2014-01-11 13:05:59
Davidzjy
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4樓2014-01-11 15:05:16
5樓2014-01-11 15:09:59
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【答案】應(yīng)助回帖
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八寶粥的: 金幣+6, ★★★★★最佳答案 2014-01-12 09:30:40
八寶粥的: 金幣+6, ★★★★★最佳答案 2014-01-12 09:30:40
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我記得我在學(xué)這些東西的時候 老師給我們看得幾張圖印象深刻 你可以自己google一下 protein surface charge的圖片 那些紅藍(lán)分別代表正負(fù)電荷 再加上conformational change 就會有結(jié)構(gòu)變化導(dǎo)致局部電性變化的示意圖了 我這里隨便挑了一個 僅供參考 更多的還是要靠你自己 附件是一篇國人發(fā)表在nature子刊《結(jié)構(gòu)和分子生物學(xué)》上的文章 通過對不同狀態(tài)下STING蛋白的晶體結(jié)構(gòu)的分析 找到了這類蛋白對cyclic di-GMP的識別和結(jié)合方式 文章的意思不需要完全明白 這篇文章的圖3b就很好的反映了當(dāng)?shù)鞍装l(fā)生構(gòu)象變化時 局部表面的電性會發(fā)生變化 Quote: In addition, the β2-β3–loop conformational rearrangement of monomer A also results in a change in its electrostatic potential surface (Fig. 3b). |
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2014-01-11 22:18:49, 876.62 K
6樓2014-01-11 22:20:36
7樓2014-01-12 09:30:57
zhouxj
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8樓2014-01-12 09:55:05
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