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用三氯乙酸沉淀后的蛋白質(zhì)，等電點會發(fā)生變化嗎 已有1人參與
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| 如題，三氯乙酸沉淀后的蛋白質(zhì)等電點會發(fā)生變化嗎 |
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7樓2014-01-12 09:30:57
Davidzjy
鐵桿木蟲 (正式寫手)
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【答案】應助回帖
★ ★ ★ ★
感謝參與，應助指數(shù) +1
八寶粥的(kx444555代發(fā)): 金幣+4, 鼓勵交流 2014-01-11 10:40:23
感謝參與，應助指數(shù) +1
八寶粥的(kx444555代發(fā)): 金幣+4, 鼓勵交流 2014-01-11 10:40:23
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原文標題《三氯乙酸對蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)穩(wěn)定性的影響》 摘錄： TCA 與蛋白質(zhì)之間主要有以下幾個方面的作用： ① 在酸性條件下與蛋白質(zhì)形成不溶性鹽； ② 作為蛋白質(zhì)變性劑使蛋白質(zhì)構(gòu)象發(fā)生改變，暴露出較多的疏水性基團, 使之聚集沉淀； ③ 隨著蛋白質(zhì)分子量的增大，其結(jié)構(gòu)復雜性與致密性越大，TCA 可能滲入分子內(nèi)部而使之較難被完全除去，在電泳前樣品加熱處理時可能使蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)發(fā)生酸水解而形成碎片，而且隨時間的延長這一作用愈加明顯； ④ 電泳圖譜顯示，BSA 、HSA 單體譜帶有較明顯的展寬現(xiàn)象，這可能是由于TCA 的結(jié)合，使SDS 與蛋白質(zhì)的結(jié)合量產(chǎn)生偏差，從而造成蛋白質(zhì)所帶電荷的不均一性，造成遷移率的不一致。 我們認為在電泳時使用TCA 對蛋白質(zhì)樣品的濃縮或除鹽時，對于分子質(zhì)量大的蛋白質(zhì)，要慎重選擇TCA。 對小分子量蛋白質(zhì)的濃縮，采用TCA 時也有兩點需要注意：一是用TCA 沉淀后， 盡量用丙酮徹底抽提TCA；二是樣品處理后要盡快進行電泳分析，以免發(fā)生聚集及斷裂， 造成結(jié)果分析的不準確。 ———————————————————————————— 摘自《第四軍醫(yī)大學學報》2001; 22 (22) |
2樓2014-01-11 09:12:42
3樓2014-01-11 13:05:59
Davidzjy
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4樓2014-01-11 15:05:16
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