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liyongliangx銅蟲 (小有名氣)
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[求助]
PCR的問題，痛苦！
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做了一個PCR ，結(jié)果如圖：10ul的體系，酶用的Phusion mix,加樣5ul ，引物 20uM 0.2ul，模板1ng/ul 0.2ul,ddH2O補至10 ul。 反應(yīng)條件是退火60度，延伸72 1min。 要擴增的片段大小為2000bp。 引物為別人文獻里報道的， 用了PRIMER 5.0 分析結(jié)果也在附件中，我問過了原作者，他告訴我他們擴增的沒有問題。但是不知道我這哪里出了問題。作者告訴我他們用50-55退火溫度都可以 ，但我做了后全是彌散帶，做了梯度后發(fā)現(xiàn)最好就是這樣了，再高的溫度就沒有帶了。。。 希望大家?guī)臀曳治龇治觥?br /> 先進的同學(xué)幫助下后進的同學(xué)。 1.png 85000F2C9B404366A35CD7F31F7F1EC9.jpg [ Last edited by 1949stone on 2013-7-1 at 07:46 ] |
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