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pandashu1988鐵蟲 (初入文壇)
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跑電泳的一點小疑問
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跑電泳時點樣先加buffer還是DNA樣本？ 師兄說最好是把凝膠放在緩沖液里面點樣，有什么好處？ 下面是小生酶切DNA后跑電泳的圖，先buffer后DNA，從右往左點樣的，為什么buffer的帶子右邊的會比左邊的跑的更前呢？還有大神們能看看哪個孔跑的片段更接近300~900bp,還是看不出來？額~ jh 2013-07-03 19 小時 24 分鐘_副本.jpg |
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yilunanxia
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kx444555: 金幣+3, 鼓勵交流 2013-07-04 10:33:51
1949stone: 回帖置頂 2013-07-04 10:37:10
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1949stone: 回帖置頂 2013-07-04 10:37:10
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跑電泳時點樣時是先將DNA模板與loading buffer混合再加樣。 師兄說最好是把凝膠放在緩沖液里面點樣，是因為loading buffer的一個作用是使DNA在液體中沉降到底部。如果不在緩沖溶液里，那loading buffer的沉降作用就無法體現(xiàn)。 我不確定你這些是不是一種樣，但是可以肯定的是你的樣本都朝著一個方向傾斜，不確定是你的電泳槽的問題還是你把膠放在電泳槽一側(cè)的原因?qū)е碌摹?br /> 至于片段大小無法判斷，因為你的marker的各個條帶大小都不確定。 |
7樓2013-07-04 10:17:54
pandashu1988
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2樓2013-07-03 20:16:22
cicelyzh
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【答案】應助回帖
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我覺得你的問題很怪，電泳上樣buffer和樣品是要混合起來的，順序只是方便操作的問題。一般都是先buffer，可以用一個槍頭去吸，然后加入樣品，因為槍頭上帶了樣品，不能反復使用造成污染。沒有緩沖液的樣品孔里是空氣，首先這對膠不好，容易干掉。其次，點樣時如果在緩沖液里樣品可以加在液體里會直接沉到樣品孔的底部。所有的凝膠電泳都是這樣做的。 至于你的電泳圖，我覺得膠做得不行或者電泳條件有問題。marker都跑歪了，而且條帶不清晰。 |
3樓2013-07-03 23:39:15
pandashu1988
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4樓2013-07-04 08:47:02
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