 |
 |
 |
 |
 |
 |
||
 |
 |
 |
 |
 |
| 查看: 3108 | 回復(fù): 12 | |||
pandashu1988鐵蟲 (初入文壇)
|
[求助]
跑電泳的一點(diǎn)小疑問
|
||
|
跑電泳時(shí)點(diǎn)樣先加buffer還是DNA樣本？ 師兄說最好是把凝膠放在緩沖液里面點(diǎn)樣，有什么好處？ 下面是小生酶切DNA后跑電泳的圖，先buffer后DNA，從右往左點(diǎn)樣的，為什么buffer的帶子右邊的會(huì)比左邊的跑的更前呢？還有大神們能看看哪個(gè)孔跑的片段更接近300~900bp,還是看不出來？額~ jh 2013-07-03 19 小時(shí) 24 分鐘_副本.jpg |
回復(fù)此樓» 收錄本帖的淘帖專輯推薦
 實(shí)驗(yàn)求助 |
» 猜你喜歡
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之“蛙測(cè)重金屬我背鍋三千”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之“鼠逃三次我發(fā)三篇SCI”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
化學(xué)工程及工業(yè)化學(xué)論文潤(rùn)色/翻譯怎么收費(fèi)?
已經(jīng)有253人回復(fù)
-
納米粒度分析
已經(jīng)有3人回復(fù)
-
林科院林化所招收材料與化工專業(yè)碩士，坐標(biāo)南京
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
留學(xué)--博士招生
已經(jīng)有16人回復(fù)
-
化學(xué)工程，本211，求調(diào)劑，ab區(qū)不限
已經(jīng)有4人回復(fù)
-
湖北師范大學(xué)招調(diào)劑啦
已經(jīng)有6人回復(fù)
-
邵陽學(xué)院食品與化學(xué)工程學(xué)院碩士調(diào)劑
已經(jīng)有0人回復(fù)
» 本主題相關(guān)價(jià)值貼推薦，對(duì)您同樣有幫助:
- 膠原蛋白的電泳為什么跑不出來？
已經(jīng)有21人回復(fù)
- 為什么我跑電泳的膠跑不出條帶
已經(jīng)有6人回復(fù)
- 我的蛋白電泳，樣為什么跑不開。
已經(jīng)有3人回復(fù)
- 關(guān)于丙烯酰胺凝膠電泳跑DNA樣品的幾個(gè)問題
已經(jīng)有9人回復(fù)
- 瓊脂糖凝膠電泳跑成這樣是什么原因？
已經(jīng)有11人回復(fù)
- 求教一個(gè)關(guān)于SDS-PAGE電泳的問題（電泳條帶的重影以及marker最后一條帶跑不出來）
已經(jīng)有5人回復(fù)
- PCR后跑電泳，整個(gè)泳道都很亮，怎么回事？
已經(jīng)有5人回復(fù)
- 跑電泳
已經(jīng)有4人回復(fù)
- 瓊脂糖凝膠電泳跑的時(shí)間長(zhǎng)了是不是就會(huì)出現(xiàn)拖尾呀？
已經(jīng)有10人回復(fù)
- 細(xì)菌RNA提取后跑電泳出現(xiàn)一條暗帶和在泳道中彌散都是什么原因？
已經(jīng)有9人回復(fù)
- 為什么熒光定量后還要跑電泳呢
已經(jīng)有15人回復(fù)
- 請(qǐng)教鹽酸胍助溶凍干蛋白干粉時(shí)，羥胺裂解后 ，跑電泳問題�。。。�
已經(jīng)有5人回復(fù)
- RNA跑電泳結(jié)果
已經(jīng)有11人回復(fù)
- 瓊脂糖凝膠電泳，跑的條帶有點(diǎn)難看
已經(jīng)有15人回復(fù)
- 怎樣跑出電泳圖很漂亮？？�。�
已經(jīng)有8人回復(fù)
- 請(qǐng)教高手 電泳為什么是蛋白質(zhì)小分子跑在最下面
已經(jīng)有10人回復(fù)
- 【求助/交流】跑電泳的膠，我是重復(fù)利用的！但是跑的條帶非常模糊！
已經(jīng)有21人回復(fù)
- 【求助/交流】RNA在跑瓊脂糖凝膠電泳過程中會(huì)降解嗎
已經(jīng)有27人回復(fù)
- 【求助/交流】蛋白跑還原電泳是一條帶，但是跑非還原電泳三四條帶，怎么使他產(chǎn)生單一?/a>
已經(jīng)有7人回復(fù)
- 【求助/交流】提質(zhì)粒后跑的電泳圖
已經(jīng)有10人回復(fù)
- 【求助/交流】提取的植物基因組DNA電泳圖，疑問？？？
已經(jīng)有17人回復(fù)
yilunanxia
金蟲 (正式寫手)
- 應(yīng)助: 37 (小學(xué)生)
- 金幣: 816.9
- 散金: 269
- 紅花: 2
- 帖子: 334
- 在線: 352.3小時(shí)
- 蟲號(hào): 1797048
- 注冊(cè): 2012-05-05
- 專業(yè): 環(huán)境微生物學(xué)
【答案】應(yīng)助回帖
★ ★ ★
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
kx444555: 金幣+3, 鼓勵(lì)交流 2013-07-04 10:33:51
1949stone: 回帖置頂 2013-07-04 10:37:10
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
kx444555: 金幣+3, 鼓勵(lì)交流 2013-07-04 10:33:51
1949stone: 回帖置頂 2013-07-04 10:37:10
|
跑電泳時(shí)點(diǎn)樣時(shí)是先將DNA模板與loading buffer混合再加樣。 師兄說最好是把凝膠放在緩沖液里面點(diǎn)樣，是因?yàn)閘oading buffer的一個(gè)作用是使DNA在液體中沉降到底部。如果不在緩沖溶液里，那loading buffer的沉降作用就無法體現(xiàn)。 我不確定你這些是不是一種樣，但是可以肯定的是你的樣本都朝著一個(gè)方向傾斜，不確定是你的電泳槽的問題還是你把膠放在電泳槽一側(cè)的原因?qū)е碌摹?br /> 至于片段大小無法判斷，因?yàn)槟愕膍arker的各個(gè)條帶大小都不確定。 |
7樓2013-07-04 10:17:54
cicelyzh
鐵桿木蟲 (職業(yè)作家)
- MolEPI: 10
- 應(yīng)助: 1662 (講師)
- 金幣: 8693.8
- 紅花: 72
- 帖子: 3516
- 在線: 456小時(shí)
- 蟲號(hào): 1614001
- 注冊(cè): 2012-02-13
- 專業(yè): 生物化學(xué)
【答案】應(yīng)助回帖
★ ★ ★
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
gyesang: 金幣+3, 鼓勵(lì)回帖應(yīng)助！ 2013-07-04 02:57:59
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
gyesang: 金幣+3, 鼓勵(lì)回帖應(yīng)助！ 2013-07-04 02:57:59
|
我覺得你的問題很怪，電泳上樣buffer和樣品是要混合起來的，順序只是方便操作的問題。一般都是先buffer，可以用一個(gè)槍頭去吸，然后加入樣品，因?yàn)闃岊^上帶了樣品，不能反復(fù)使用造成污染。沒有緩沖液的樣品孔里是空氣，首先這對(duì)膠不好，容易干掉。其次，點(diǎn)樣時(shí)如果在緩沖液里樣品可以加在液體里會(huì)直接沉到樣品孔的底部。所有的凝膠電泳都是這樣做的。 至于你的電泳圖，我覺得膠做得不行或者電泳條件有問題。marker都跑歪了，而且條帶不清晰。 |
3樓2013-07-03 23:39:15
pandashu1988
鐵蟲 (初入文壇)
- 應(yīng)助: 0 (幼兒園)
- 金幣: 44.5
- 帖子: 11
- 在線: 12小時(shí)
- 蟲號(hào): 2514999
- 注冊(cè): 2013-06-20
- 專業(yè): 分子與進(jìn)化生態(tài)學(xué)
2樓2013-07-03 20:16:22
pandashu1988
鐵蟲 (初入文壇)
- 應(yīng)助: 0 (幼兒園)
- 金幣: 44.5
- 帖子: 11
- 在線: 12小時(shí)
- 蟲號(hào): 2514999
- 注冊(cè): 2013-06-20
- 專業(yè): 分子與進(jìn)化生態(tài)學(xué)
4樓2013-07-04 08:47:02
1949stone
榮譽(yù)版主 (知名作家)
海納百川
- MolEPI: 4
- 應(yīng)助: 95 (初中生)
- 貴賓: 2.38
- 金幣: 2638.7
- 散金: 3394
- 紅花: 177
- 沙發(fā): 8
- 帖子: 9832
- 在線: 2692.8小時(shí)
- 蟲號(hào): 765987
- 注冊(cè): 2009-05-08
- 性別: GG
- 專業(yè): 藥物分析
- 管轄: 分子生物
【答案】應(yīng)助回帖
★ ★
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
kx444555: 金幣+2, 鼓勵(lì)交流 2013-07-04 10:33:43
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
kx444555: 金幣+2, 鼓勵(lì)交流 2013-07-04 10:33:43
|
在電泳液加就可以啊 buffer有沉降的作用 @cicelyzh 的意見很中肯 你的mark跑的有點(diǎn)問題 但是起碼條帶跑開了 分離度也行 但是你的酶切樣本 說句難聽的 一塌糊涂 沒有您所謂片段 需要重新設(shè)計(jì)下試驗(yàn) 慢慢摸索下 |
» 本帖已獲得的紅花（最新10朵）
5樓2013-07-04 09:42:56
幽魂銀龍
銅蟲 (初入文壇)
- 應(yīng)助: 8 (幼兒園)
- 金幣: 39.9
- 帖子: 31
- 在線: 46.6小時(shí)
- 蟲號(hào): 2064986
- 注冊(cè): 2012-10-16
- 性別: GG
- 專業(yè): 免疫生物學(xué)
6樓2013-07-04 10:05:17
pandashu1988
鐵蟲 (初入文壇)
- 應(yīng)助: 0 (幼兒園)
- 金幣: 44.5
- 帖子: 11
- 在線: 12小時(shí)
- 蟲號(hào): 2514999
- 注冊(cè): 2013-06-20
- 專業(yè): 分子與進(jìn)化生態(tài)學(xué)
送紅花一朵 |
這個(gè)圖是提取某步甲總DNA之后割膠回收在酶切的。 之前沒有割膠回收直接酶切可以看到中間有很亮的條帶，但是又去提取的DNA有拖帶現(xiàn)象，所以先做了割膠，之后再酶切反而是這個(gè)樣子。。。所以應(yīng)該和樣本沒關(guān)系吧，額~ 還有請(qǐng)教下，用的酶是TAKARA的SAU3AI， ①說明書上提到的20ul反應(yīng)體系是1ul酶配1ug的DNA； ②上面的1U活性單位定義是37度50ul體系里將1ug λDNA完全分解的量。 ③到手的管子上標(biāo)的酶濃度是10U/ul，那么是不是要將酶稀釋10倍了再加？ 還有我看論壇里都說這個(gè)酶的最適濃度是0.01U/ug，這個(gè)說明書上的定義豈不是有矛盾，額~ |
8樓2013-07-04 14:26:28
pandashu1988
鐵蟲 (初入文壇)
- 應(yīng)助: 0 (幼兒園)
- 金幣: 44.5
- 帖子: 11
- 在線: 12小時(shí)
- 蟲號(hào): 2514999
- 注冊(cè): 2013-06-20
- 專業(yè): 分子與進(jìn)化生態(tài)學(xué)
，這個(gè)不是PCR產(chǎn)物，是直接提取總DNA割膠回收后酶切的，因?yàn)殡娪緳z測(cè)看到有拖帶~但是沒有割膠回收直接把總DNA酶切的話就能在想要的片段大小那里看到明亮條帶。。。所以很糾結(jié)，難道是DNA量不夠，打算把回收的DNA P一下再來酶切看看 9樓2013-07-04 14:29:56
grape_vine
金蟲 (小有名氣)
- 應(yīng)助: 52 (初中生)
- 金幣: 1139
- 紅花: 6
- 帖子: 259
- 在線: 95.2小時(shí)
- 蟲號(hào): 2444701
- 注冊(cè): 2013-05-02
- 專業(yè): 果樹學(xué)
10樓2013-07-04 14:43:12
相關(guān)版塊跳轉(zhuǎn)
我要訂閱樓主 pandashu1988 的主題更新
| 最具人氣熱帖推薦 [查看全部] | 作者 | 回/看 | 最后發(fā)表 | |
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 266求調(diào)劑 +3 | 學(xué)員97LZgn 2026-04-02 | 3/150 |
|
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 材料考研調(diào)劑 +6 | Gs大王 2026-04-02 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 805600專碩材料與化工348分求調(diào)劑 +6 | 上學(xué)啦！ 2026-04-01 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 282求調(diào)劑 +17 | ycy1201 2026-04-01 | 19/950 |
|
|
|
[考研] 339求調(diào)劑，想調(diào)回江蘇 +7 | 烤麥芽 2026-03-27 | 10/500 |
|
|
|
[考研] 26考研調(diào)劑 +3 | Wnz.20030617 2026-04-01 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 材料專業(yè)調(diào)劑 +5 | 啦啦啦哭 2026-03-31 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 085602 307分 求調(diào)劑 +10 | 不知道叫什么！ 2026-03-26 | 10/500 |
|
|
|
[考研] 合肥區(qū)域性重點(diǎn)一本招收調(diào)劑 +4 | 6266jl 2026-03-30 | 8/400 |
|
|
|
[考研] 一志愿哈爾濱工業(yè)大學(xué)材料與化工方向336分 +13 | 辰沐5211314 2026-03-26 | 13/650 |
|
|
|
[考研] 本科211生物醫(yī)學(xué)工程085409求調(diào)劑339分 +7 | 里子木yy 2026-03-29 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 332求調(diào)劑 +6 | @MZB382400 2026-03-28 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 求調(diào)劑 +10 | 張zz111 2026-03-27 | 11/550 |
|
|
|
[考研] 一志愿北京理工大學(xué)本科211材料工程294求調(diào)劑 +8 | mikasa的圍巾 2026-03-28 | 8/400 |
|
|
|
[碩博家園] 招收生物學(xué)/細(xì)胞生物學(xué)調(diào)劑 +4 | IceGuo 2026-03-26 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 081200-314 +3 | LILIQQ 2026-03-27 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 285求調(diào)劑 +4 | AZMK 2026-03-27 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 復(fù)試調(diào)劑，一志愿南農(nóng)083200食品科學(xué)與工程 +5 | XQTJZ 2026-03-26 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 292求調(diào)劑 +4 | 求求了收下我吧?/a> 2026-03-26 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 324求調(diào)劑 +5 | hanamiko 2026-03-26 | 5/250 |
|