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pandashu1988鐵蟲 (初入文壇)
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跑電泳的一點(diǎn)小疑問(wèn)
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跑電泳時(shí)點(diǎn)樣先加buffer還是DNA樣本？ 師兄說(shuō)最好是把凝膠放在緩沖液里面點(diǎn)樣，有什么好處？ 下面是小生酶切DNA后跑電泳的圖，先buffer后DNA，從右往左點(diǎn)樣的，為什么buffer的帶子右邊的會(huì)比左邊的跑的更前呢？還有大神們能看看哪個(gè)孔跑的片段更接近300~900bp,還是看不出來(lái)？額~ jh 2013-07-03 19 小時(shí) 24 分鐘_副本.jpg |
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pandashu1988
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這個(gè)圖是提取某步甲總DNA之后割膠回收在酶切的。 之前沒(méi)有割膠回收直接酶切可以看到中間有很亮的條帶，但是又去提取的DNA有拖帶現(xiàn)象，所以先做了割膠，之后再酶切反而是這個(gè)樣子。。。所以應(yīng)該和樣本沒(méi)關(guān)系吧，額~ 還有請(qǐng)教下，用的酶是TAKARA的SAU3AI， ①說(shuō)明書上提到的20ul反應(yīng)體系是1ul酶配1ug的DNA； ②上面的1U活性單位定義是37度50ul體系里將1ug λDNA完全分解的量。 ③到手的管子上標(biāo)的酶濃度是10U/ul，那么是不是要將酶稀釋10倍了再加？ 還有我看論壇里都說(shuō)這個(gè)酶的最適濃度是0.01U/ug，這個(gè)說(shuō)明書上的定義豈不是有矛盾，額~ |
8樓2013-07-04 14:26:28
pandashu1988
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2樓2013-07-03 20:16:22
cicelyzh
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gyesang: 金幣+3, 鼓勵(lì)回帖應(yīng)助！ 2013-07-04 02:57:59
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我覺(jué)得你的問(wèn)題很怪，電泳上樣buffer和樣品是要混合起來(lái)的，順序只是方便操作的問(wèn)題。一般都是先buffer，可以用一個(gè)槍頭去吸，然后加入樣品，因?yàn)闃岊^上帶了樣品，不能反復(fù)使用造成污染。沒(méi)有緩沖液的樣品孔里是空氣，首先這對(duì)膠不好，容易干掉。其次，點(diǎn)樣時(shí)如果在緩沖液里樣品可以加在液體里會(huì)直接沉到樣品孔的底部。所有的凝膠電泳都是這樣做的。 至于你的電泳圖，我覺(jué)得膠做得不行或者電泳條件有問(wèn)題。marker都跑歪了，而且條帶不清晰。 |
3樓2013-07-03 23:39:15
pandashu1988
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4樓2013-07-04 08:47:02
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