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[求助]
求助啊，誰知道pGEM-T載體連接的buffer中是不是有把載體切開的內(nèi)切酶啊
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| 哪位大俠知道，pGEM-T載體連接的buffer中是不是有把載體切開的內(nèi)切酶啊，只是T4連接酶能把載體和目的片段連接起來嗎？這個(gè)內(nèi)切酶又是什么呢？ |
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anlewo7777
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【答案】應(yīng)助回帖
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感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
laozuzunzhe: 金幣+3, 鼓勵(lì)應(yīng)助@！ 2013-07-10 23:29:08
anm0316: 金幣+10, ★★★很有幫助 2013-07-11 10:06:29
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| 沒有，只是在制作載體的時(shí)候，用某個(gè)內(nèi)切酶把一個(gè)位點(diǎn)切開，3‘端都是T,而我們PCR的產(chǎn)物末端多有一個(gè)A，這樣經(jīng)過T4連接酶就形成了dA:dT配對連接，形成有兩個(gè)缺刻的環(huán)狀DNA，轉(zhuǎn)入細(xì)胞內(nèi)后會被細(xì)胞內(nèi)的連接酶補(bǔ)上缺口，形成完整的雙鏈DNA，然后在胞內(nèi)復(fù)制。如果我們的質(zhì)粒的多克隆位點(diǎn)上有限制性內(nèi)切酶位點(diǎn)，切割后也可以在3’端有T的話，也可以當(dāng)T載體用。 |
2樓2013-07-10 13:13:16
3樓2013-07-10 16:04:27
anlewo7777
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4樓2013-07-10 20:37:15
cicelyzh
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7樓2013-07-11 10:07:34
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