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[求助]
求助啊，誰知道pGEM-T載體連接的buffer中是不是有把載體切開的內(nèi)切酶啊
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| 哪位大俠知道，pGEM-T載體連接的buffer中是不是有把載體切開的內(nèi)切酶啊，只是T4連接酶能把載體和目的片段連接起來嗎？這個內(nèi)切酶又是什么呢？ |
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7樓2013-07-11 10:07:34
anlewo7777
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| 沒有，只是在制作載體的時候，用某個內(nèi)切酶把一個位點切開，3‘端都是T,而我們PCR的產(chǎn)物末端多有一個A，這樣經(jīng)過T4連接酶就形成了dA:dT配對連接，形成有兩個缺刻的環(huán)狀DNA，轉(zhuǎn)入細胞內(nèi)后會被細胞內(nèi)的連接酶補上缺口，形成完整的雙鏈DNA，然后在胞內(nèi)復制。如果我們的質(zhì)粒的多克隆位點上有限制性內(nèi)切酶位點，切割后也可以在3’端有T的話，也可以當T載體用。 |
2樓2013-07-10 13:13:16
3樓2013-07-10 16:04:27
anlewo7777
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4樓2013-07-10 20:37:15
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