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夏橙秋蜜

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[求助] PCR結(jié)果分析

求助，誰(shuí)能幫我分析下，我做的PCR為什么條帶很暗，需不需要把退火溫度給降低下？

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附件 1 : 2013.7.20引物3，材料3，56度檢測(cè).tif

2013-07-21 15:15:18, 669.77 K

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1樓 2013-07-21 15:16:43

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cicelyzh

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夏橙秋蜜(gyesang代發(fā)): 金幣+2, 鼓勵(lì)回帖應(yīng)助！ 2013-07-21 23:06:50

引物二聚體比較多，說(shuō)明PCR效果不好。除了引物二聚體以外還有幾條帶，目的條帶是最亮的那條嗎？此外，你用什么模板P的，模板用量是否合適？

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2樓2013-07-21 21:31:13

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Sthunder

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kx444555: 金幣+2, 鼓勵(lì)交流 2013-07-22 11:48:10

我不知道你的目的條帶為多大，但很明顯你存在非特異條帶，而且具體比mark還淺，所以強(qiáng)烈建議適當(dāng)拔高退火溫度，最后做個(gè)TD PCR. PS：只有有目的條帶說(shuō)明你的模板就沒(méi)有問(wèn)題！Good luck！

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3樓2013-07-22 05:49:51

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引用回帖:

2樓: Originally posted by cicelyzh at 2013-07-21 21:31:13
引物二聚體比較多，說(shuō)明PCR效果不好。除了引物二聚體以外還有幾條帶，目的條帶是最亮的那條嗎？此外，你用什么模板P的，模板用量是否合適？

是，但還是效果不好，可能是引物特異性不好，模板是DNA，量還行

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4樓2013-08-31 20:45:02

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引用回帖:

4樓: Originally posted by 夏橙秋蜜 at 2013-08-31 20:45:02
是，但還是效果不好，可能是引物特異性不好，模板是DNA，量還行...

雜帶多可能需要適當(dāng)升高退火溫度。此外，不要加太多模板。

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5樓2013-08-31 23:02:26

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