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[交流]
關(guān)于PCR和PAGE膠
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這段時間一直在做分子標記，被PCR整的夠嗆，卡在選擴這已經(jīng)2個月了，產(chǎn)物總是時有時無，同樣的材料重復一次，結(jié)果都會不一樣或者什么都沒有了，換了所有的試劑，換了新設計的引物，結(jié)果一樣，真是快崩潰了。 另外就是PAGE膠，跑過的人都知道，這個也是很熬人的，做一次大半天就耗進去了，但擴增產(chǎn)物又只能用這個來檢測，不然看不清楚，跑膠真是門藝術(shù)，中間的不可控步驟太多，這些都會造成你的結(jié)果不同。 有沒有經(jīng)驗人士，遇到同樣的問題，大家交流交流~ 祝大伙實驗順利��！ |
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9樓2013-08-30 11:46:11
2樓2013-07-23 09:26:46
★ ★ ★ ★
小木蟲: 金幣+0.5, 給個紅包，謝謝回帖
kx444555: 金幣+3, 鼓勵交流 2013-07-23 11:15:11
小木蟲: 金幣+0.5, 給個紅包，謝謝回帖
kx444555: 金幣+3, 鼓勵交流 2013-07-23 11:15:11
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我之前也遇到過這樣的問題。有點經(jīng)驗可以和你說說 一，關(guān)于彌散的問題，你首先要確定你的模板沒有問題，可以跑個膠看一看大小，也可以做個測序。然后PCR時候做個陰性對照，排除是不是污染造成的。 二，你要找到模板和引物量的比例，可能是你模板量太多，也可能是引物太多。我比較推薦1ng/UL的模板濃度，引物可以用10uM和5uM都試試。 三，就是你操作的問題，要看你的是什么樣的酶。反應體系最好按著說明書上做。注意一點說明書上note 內(nèi)容：比如在冰上配體系，然后等到PCR儀進入到變性溫度的時候再把PCR管放到PCR儀里。 |
» 本帖已獲得的紅花（最新10朵）
432898993樓2013-07-23 10:14:43
4樓2013-07-23 12:47:05
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