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輕塵紫陌銀蟲 (初入文壇)
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[求助]
關(guān)于手提質(zhì)粒質(zhì)量的一些問題
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| LZ最近在做質(zhì)粒手提，提到的質(zhì)粒最后用TE緩沖液溶解，用于PCR擴(kuò)增，其中出現(xiàn)了一個問題，就是質(zhì)粒的濃度和純度都挺好，濃度有2ug/ul，OD260/OD280=1.9多，用提取的質(zhì)粒直接進(jìn)行PCR效果較好，按理說這個濃度稀釋個10倍或者100倍擴(kuò)增效果應(yīng)該也不會太差，可是只有原始濃度的能擴(kuò)增出來，稀釋過的都不穩(wěn)定或者擴(kuò)增不出來，不知道是提取步驟除了問題還是怎么回事，注：稀釋用的還是TE，請教大神分析一下原因。 |
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cicelyzh
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【答案】應(yīng)助回帖
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感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
輕塵紫陌: 金幣+30, ★★★★★最佳答案 2013-07-29 08:57:49
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我沒有看錯吧，你用濃度是2μg/μl的質(zhì)粒直接PCR？如果真是這個濃度的質(zhì)粒你直接拿槍頭占一下跑電泳丟可以看到帶的，你需要稀釋至少1000倍。 我有疑問的是你的質(zhì)粒提出來后是否跑電泳觀察？提質(zhì)粒時是否加了RNase消化RNA？我懷疑是樣品中有大量RNA，干擾DNA定量，同時也會影響引物與模板結(jié)合。 |
2樓2013-07-26 01:22:12
輕塵紫陌
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3樓2013-07-26 11:27:53
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4樓2013-07-26 15:08:24
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5樓2013-07-29 08:57:33
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