 |
 |
 |
 |
 |
 |
||
 |
 |
 |
 |
 |
| 5 | 1/1 | 返回列表 |
| 查看: 1482 | 回復(fù): 4 | |||
| 當(dāng)前只顯示滿足指定條件的回帖，點(diǎn)擊這里查看本話題的所有回帖 | |||
輕塵紫陌銀蟲(chóng) (初入文壇)
|
[求助]
關(guān)于手提質(zhì)粒質(zhì)量的一些問(wèn)題
|
||
| LZ最近在做質(zhì)粒手提，提到的質(zhì)粒最后用TE緩沖液溶解，用于PCR擴(kuò)增，其中出現(xiàn)了一個(gè)問(wèn)題，就是質(zhì)粒的濃度和純度都挺好，濃度有2ug/ul，OD260/OD280=1.9多，用提取的質(zhì)粒直接進(jìn)行PCR效果較好，按理說(shuō)這個(gè)濃度稀釋個(gè)10倍或者100倍擴(kuò)增效果應(yīng)該也不會(huì)太差，可是只有原始濃度的能擴(kuò)增出來(lái)，稀釋過(guò)的都不穩(wěn)定或者擴(kuò)增不出來(lái)，不知道是提取步驟除了問(wèn)題還是怎么回事，注：稀釋用的還是TE，請(qǐng)教大神分析一下原因。 |
回復(fù)此樓» 猜你喜歡
290求調(diào)劑
已經(jīng)有3人回復(fù)
-
求調(diào)劑
已經(jīng)有3人回復(fù)
-
327求調(diào)劑
已經(jīng)有3人回復(fù)
-
085600 286分 材料求調(diào)劑
已經(jīng)有11人回復(fù)
-
一志愿河北工業(yè)大學(xué)0817化工278分求調(diào)劑
已經(jīng)有15人回復(fù)
-
085601材料工程找調(diào)劑
已經(jīng)有15人回復(fù)
-
材料與化工272求調(diào)劑
已經(jīng)有15人回復(fù)
-
南京大學(xué)化學(xué)調(diào)劑
已經(jīng)有14人回復(fù)
-
一志愿北京工業(yè)大學(xué)，324分求調(diào)劑
已經(jīng)有6人回復(fù)
-
求調(diào)劑
已經(jīng)有5人回復(fù)
» 本主題相關(guān)價(jià)值貼推薦，對(duì)您同樣有幫助:
- 手提質(zhì)粒
已經(jīng)有13人回復(fù)
- 提取的質(zhì)粒A260/280是多少說(shuō)明質(zhì)粒的質(zhì)量比較好？
已經(jīng)有8人回復(fù)
- 新提的質(zhì)粒DNA，關(guān)于濃度和純度蟲(chóng)友們發(fā)表一些看法吧
已經(jīng)有32人回復(fù)
- 【求助/交流】請(qǐng)問(wèn)大家關(guān)于dna回收的問(wèn)題
已經(jīng)有14人回復(fù)
輕塵紫陌
銀蟲(chóng) (初入文壇)
- 應(yīng)助: 0 (幼兒園)
- 金幣: 709
- 散金: 60
- 帖子: 24
- 在線: 15.4小時(shí)
- 蟲(chóng)號(hào): 1652435
- 注冊(cè): 2012-02-29
- 專(zhuān)業(yè): 微生物遺傳育種學(xué)
|
關(guān)于這個(gè)濃度的問(wèn)題，我當(dāng)時(shí)提的時(shí)候是500ml的菌液，最后回收質(zhì)粒用了6ml溶解質(zhì)粒，RNase 我是最后加入那6ml的質(zhì)粒中，終濃度是40ug/ul，不知道是不是這個(gè)環(huán)節(jié)有問(wèn)題，質(zhì)粒提出來(lái)以后是有電泳的，上樣5ul，條帶非常亮。而且在PCR的時(shí)候，最開(kāi)始是稀釋10000倍都可以，后面再重復(fù)的時(shí)候漸漸的就是1000倍，100倍的才能擴(kuò)增出來(lái)，不知道是不是用TE稀釋會(huì)影響， |
3樓2013-07-26 11:27:53
cicelyzh
鐵桿木蟲(chóng) (職業(yè)作家)
- MicEPI: 1
- 應(yīng)助: 1662 (講師)
- 金幣: 8693.8
- 紅花: 72
- 帖子: 3516
- 在線: 456小時(shí)
- 蟲(chóng)號(hào): 1614001
- 注冊(cè): 2012-02-13
- 專(zhuān)業(yè): 生物化學(xué)
【答案】應(yīng)助回帖
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
輕塵紫陌: 金幣+30, ★★★★★最佳答案 2013-07-29 08:57:49
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
輕塵紫陌: 金幣+30, ★★★★★最佳答案 2013-07-29 08:57:49
|
我沒(méi)有看錯(cuò)吧，你用濃度是2μg/μl的質(zhì)粒直接PCR？如果真是這個(gè)濃度的質(zhì)粒你直接拿槍頭占一下跑電泳丟可以看到帶的，你需要稀釋至少1000倍。 我有疑問(wèn)的是你的質(zhì)粒提出來(lái)后是否跑電泳觀察？提質(zhì)粒時(shí)是否加了RNase消化RNA？我懷疑是樣品中有大量RNA，干擾DNA定量，同時(shí)也會(huì)影響引物與模板結(jié)合。 |
2樓2013-07-26 01:22:12
cicelyzh
鐵桿木蟲(chóng) (職業(yè)作家)
- MicEPI: 1
- 應(yīng)助: 1662 (講師)
- 金幣: 8693.8
- 紅花: 72
- 帖子: 3516
- 在線: 456小時(shí)
- 蟲(chóng)號(hào): 1614001
- 注冊(cè): 2012-02-13
- 專(zhuān)業(yè): 生物化學(xué)
【答案】應(yīng)助回帖
|
RNase加的量沒(méi)錯(cuò)嗎？我看著很多啊。如果是40ug/ul加在6ml里面需要加0.24g的酶！ 一般質(zhì)粒PCR時(shí)只需要加10-100pg，所以剛開(kāi)始的稀釋倍數(shù)是沒(méi)問(wèn)題的。用TE稀釋也沒(méi)有關(guān)系，雖然TE里面的EDTA會(huì)對(duì)PCR反應(yīng)有一點(diǎn)抑制，但你加的模板體積通常很少，所以EDTA的終濃度在PCR體系里是非常低的。我覺(jué)得問(wèn)題主要是因?yàn)橄♂尯蟮腄NA不如在濃溶液里穩(wěn)定，經(jīng)反復(fù)凍融后質(zhì)量會(huì)有下降。所以稀釋后的樣品最好分裝一下。 |
4樓2013-07-26 15:08:24
輕塵紫陌
銀蟲(chóng) (初入文壇)
- 應(yīng)助: 0 (幼兒園)
- 金幣: 709
- 散金: 60
- 帖子: 24
- 在線: 15.4小時(shí)
- 蟲(chóng)號(hào): 1652435
- 注冊(cè): 2012-02-29
- 專(zhuān)業(yè): 微生物遺傳育種學(xué)
5樓2013-07-29 08:57:33
| 最具人氣熱帖推薦 [查看全部] | 作者 | 回/看 | 最后發(fā)表 | |
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 317分 一志愿南理工材料工程 本科湖工大 求調(diào)劑 +10 | 芋泥小鈴鐺 2026-03-28 | 10/500 |
|
|---|---|---|---|---|
|
|
[考研] 化學(xué)0703 調(diào)劑 306分 一志愿211 +7 | 26要上岸 2026-03-28 | 7/350 |
|
|
[考研] 一志愿北京理工大學(xué)本科211材料工程294求調(diào)劑 +8 | mikasa的圍巾 2026-03-28 | 8/400 |
|
|
|
[考研] 352分-085602-一志愿985 +5 | 海納百川Ly 2026-03-29 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 求調(diào)劑 +7 | 爭(zhēng)取九點(diǎn)睡 2026-03-28 | 8/400 |
|
|
|
[考研] 生物學(xué)學(xué)碩，一志愿湖南大學(xué)，初試成績(jī)338 +6 | YYYYYNNNNN 2026-03-26 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 071000生物學(xué)求調(diào)劑，初試成績(jī)343 +7 | 小小甜面團(tuán) 2026-03-25 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 一志愿北化085600材料專(zhuān)碩275|有文章專(zhuān)利｜求調(diào)劑 +7 | Micky11223 2026-03-25 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 一志愿南昌大學(xué)324求調(diào)劑 +7 | hanamiko 2026-03-27 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 291求調(diào)劑 +6 | HanBeiNingZC 2026-03-24 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 086000調(diào)劑 +3 | 7901117076 2026-03-26 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 265求調(diào)劑11408 +3 | 劉小鹿lu 2026-03-27 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 考研化學(xué)308分求調(diào)劑 +10 | 你好明天你好 2026-03-23 | 12/600 |
|
|
|
[考研] 085600，材料與化工321分，求調(diào)劑 +9 | 大饞小子 2026-03-27 | 9/450 |
|
|
|
[考研] 314求調(diào)劑 +3 | 溪云珂 2026-03-26 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 一志愿鄭大085600，310分求調(diào)劑 +5 | 李瀟可 2026-03-26 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 333求調(diào)劑 +6 | wfh030413@ 2026-03-23 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 生物學(xué) 296 求調(diào)劑 +4 | 朵朵- 2026-03-26 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 一志愿河工大 081700 276求調(diào)劑 +4 | 地球繞著太陽(yáng)轉(zhuǎn) 2026-03-23 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 機(jī)械學(xué)碩總分317求調(diào)劑�。。�！ +4 | Acaciad 2026-03-25 | 4/200 |
|