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[求助]
測細胞凋亡 增值~求助 沒做過
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| 實驗用不同的飼料喂實驗體，最后要測腸道上皮細胞的凋亡和增值，兩個月的投喂，就直接最后取樣試劑盒就能搞定增值，細胞儀測凋亡么 ？來個思路啊 求助~ |
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【答案】應(yīng)助回帖
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感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
laozuzunzhe: 金幣+5, good！ 2013-07-25 21:30:42
愛睡豬: 金幣+30, ★★★很有幫助, 試劑盒就行啊 太好了 省事 感謝 2013-07-26 09:23:47
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愛睡豬: 金幣+30, ★★★很有幫助, 試劑盒就行啊 太好了 省事 感謝 2013-07-26 09:23:47
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這是可以的啊，你只要看凋亡和增殖嗎？我用過一個試劑盒細胞周期與凋亡檢測試劑盒(Cell Cycle and Apoptosis Analysis Kit)，步驟如下： 1. 自備試劑： PBS；70%乙醇 2. 細胞樣品準備： a、 貼壁細胞：吸棄細胞培養(yǎng)液，胰酶消化吹打細胞，制備單細胞懸液，1000g離心5分鐘沉淀細胞后，用1ml預(yù)冷的PBS重懸。然后再一次1000g離心5分鐘沉淀細胞。 b、 懸浮細胞：1000g離心5分鐘沉淀細胞后，用1ml預(yù)冷的PBS重懸。然后再一次1000g離心5分鐘沉淀細胞。 c、 組織細胞：將組織塊用剪刀剪成盡量小的小塊后，用0.25%的胰酶消化0.5-1個小時。經(jīng)過200-400目篩網(wǎng)過濾得到單細胞懸液。1000g離心5分鐘沉淀細胞后，用1ml預(yù)冷的PBS重懸。然后再一次1000g離心5分鐘沉淀細胞。 3. 細胞固定： 細胞沉淀用1ml預(yù)冷的70%乙醇輕輕混勻，4℃固定2個小時以上或者過夜。接下來1000g離心5分鐘沉淀細胞后，用1ml預(yù)冷的PBS重懸。然后再次1000g離心5分鐘沉淀細胞。 4. 染色： 碘化丙啶染色液配置：0.5 ml染色緩沖液中加入10 ul碘化丙啶儲液和10ul RNase A，混勻待用。每個細胞樣品加入0.5ml配置好的碘化丙啶染色液，輕輕混勻重懸細胞。37℃，避光溫浴30分鐘后，即可上流式細胞儀檢測（5小時內(nèi)完成為佳）。激發(fā)波長為488nm，檢測紅色熒光。 注意事項： 1. 操作碘化丙啶時，應(yīng)注意防護，保護眼睛、避免吸入、并戴一次性手套。 2. 碘化丙啶存在淬滅現(xiàn)象，保存和使用過程中注意避光。 |
2樓2013-07-25 16:31:20
3樓2013-07-26 11:15:55
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