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[求助]
大腸桿菌工程菌發(fā)酵染菌問題解決方案
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本人現(xiàn)在正做大腸桿菌工程菌的發(fā)酵實驗，目前遇到一個比較棘手的問題，特來此地求助，忘廣大戰(zhàn)友鼎力相助，小弟先行謝過： 我遇到的問題是：在發(fā)酵試驗中，按照給出的既定方案，先做搖瓶驗證， 然后上發(fā)酵罐，做小試，問題就出在這里，在搖瓶中，按照給出的方案，從來沒有染菌，但是最近做了好幾次發(fā)酵罐的驗證實驗，但是每次不管是種子罐還是發(fā)酵罐都染菌，方案給出的培養(yǎng)條件是：搖瓶的培養(yǎng)是種子瓶32℃，220rpm條件下培養(yǎng)40小時，按照這個條件，從沒染菌，但是只要上罐子，都要染菌，但是，在罐子中，種子罐中，接種前有取消后樣看是否染菌，確定沒染菌才接種，接種后的一天，取樣看，還是沒染菌，可是到了30幾個小時到轉發(fā)酵罐的時候取樣，發(fā)現(xiàn)染菌都特別厲害，每次都是這樣，用種子瓶直接轉發(fā)酵罐，在發(fā)酵罐中同樣存在這個問題，我想了好久，都沒想明白到底是哪里出了問題，所以來此救助，感謝各位大神。。。。。 |
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 大腸桿菌工程菌發(fā)酵 |
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【答案】應助回帖
★ ★ ★ ★ ★
感謝參與，應助指數(shù) +1
錯愛一生: 金幣+5, ★★★很有幫助 2013-07-28 16:16:02
感謝參與，應助指數(shù) +1
錯愛一生: 金幣+5, ★★★很有幫助 2013-07-28 16:16:02
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1、我認為搖瓶發(fā)酵只是為了摸索一下上罐發(fā)酵的控制過程條件和尋找一株相對有潛力的工程菌株，和上罐發(fā)酵過程染菌并沒有直接關系，他們的關系只存在于放大過程中的不適合與調整。 2、從你的描述看出，一般的染菌出現(xiàn)在種子轉接發(fā)酵過程中，我認為很有可能的原因有如下3個： a、發(fā)酵罐的滅菌過程不徹底，你可以選擇如下方式滅菌，先空消在實消，這樣滅菌相對徹底； b、從種子罐接入發(fā)酵罐的過程中的操作，我不是很清楚你的發(fā)酵罐有多大是實驗的小試還是生產，但是看你說從搖瓶直接轉入發(fā)酵罐來看，這一切的操作是不是在接種口處外接火焰圈進行的，如果是，是不是在這個操作過程引入了雜菌； c、空氣系統(tǒng)是一個很有可能的原因，通入的無菌空氣應該是經過膜過濾的，濾膜是否太久，沒有了過濾的作用，可以在進罐前再添加一個高溫過濾的設備。 一般我們實驗室的應對策略：先進行3-5天的實驗室熏蒸，清潔發(fā)酵間的衛(wèi)生，對發(fā)酵設備進行檢查更新在嘗試發(fā)酵過程，現(xiàn)在天氣比較熱，本身就是一些雜菌的活躍期，一般工廠在這個階段都會停產，若還是不行可以考慮天氣冷一些的時間再做，住實驗順利！ |
3樓2013-07-28 11:04:27
2樓2013-07-28 07:50:14
4樓2013-07-28 16:14:18
5樓2013-10-09 14:42:00
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