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liangjuan2007

銅蟲(chóng) (小有名氣)

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[求助] 關(guān)于SDS-PAGE和WB的問(wèn)題

我做SDS-PAGE和WB時(shí)得到24KDa和14kDa兩條較明顯的帶，把這兩條帶做質(zhì)譜分析，結(jié)果是同一種蛋白，分子量39kDa，是一種糖蛋白。很多文獻(xiàn)都說(shuō)這種39kDa的蛋白是一條肽鏈組成的B螺旋結(jié)構(gòu)，含有二硫鍵。請(qǐng)問(wèn)我做SDS-PAGE和WB的合理嗎？
難道是變性時(shí)使蛋白變成兩條鏈了？還是說(shuō)糖鏈脫除了，還是其他原因？為什么SDS是24kDa和14kDa？而兩條帶質(zhì)譜分析結(jié)果都是39kDa，且同一種蛋白呢？

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1樓 2013-07-29 19:16:39

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cicelyzh

鐵桿木蟲(chóng) (職業(yè)作家)

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silicare: 金幣+3, 謝謝參與 2013-07-30 08:03:32

文獻(xiàn)上說(shuō)的蛋白與你做的是同一個(gè)物種嗎？你查一下你做的物種39KD蛋白是否是由兩條多肽表達(dá)用分子間二硫鍵連接的。
回答樓上的問(wèn)題，SDS-PAGE定分子量雖然不是很精確，但完全可以區(qū)分三十多、二十多還是十多KD的蛋白。

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3樓2013-07-29 23:24:51

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shi16

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137167741: 金幣+2, 小木蟲(chóng)交流，共同進(jìn)步~~ 2013-07-30 09:28:38

弱弱的問(wèn)一句。WB得到的蛋白長(zhǎng)能精確到個(gè)位數(shù)？

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2樓2013-07-29 21:21:43

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Sthunder

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silicare: 金幣+3, 謝謝參與 2013-07-30 08:03:38
liangjuan2007: 金幣+2 2013-08-01 09:10:43

仔細(xì)檢查一下質(zhì)譜結(jié)果，如果我估計(jì)的沒(méi)錯(cuò)的話是多聚體的原因（因?yàn)橛卸蜴I）

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互助互勵(lì)，共奮共進(jìn)�。�

4樓2013-07-30 01:25:40

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liangjuan2007: 金幣+2, ★★★很有幫助 2013-07-30 14:55:43

考慮是否聚體。查查文獻(xiàn)看一下聚體存在的條件，是否和你純化的條件有交叉。

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5樓2013-07-30 09:14:53

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