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fuyuandj86版主 (著名寫手)
己所不欲，勿施于人
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[求助]
PCR引物設(shè)計(jì)Tm
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| 請問PCR引物溫度如果高于extension temperature(就是72度那一步)會(huì)不會(huì)有很大影響? 我的引物GC含量太高了,但是序列又不能隨便改,要么引物會(huì)很短,要么Tm高于72度,不知道會(huì)不會(huì)有影響. |
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15879003030
銅蟲 (小有名氣)
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2樓2013-08-16 10:44:17
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引物GC含量太高，TM高一點(diǎn)PCR一般 沒有問題，TM高與72度也可以，extension temperature這步主要是考慮Taq聚合酶的承受能力和酶活力，溫度高些高與72度，Taq效率不是最高，穩(wěn)定性可能也不是最為穩(wěn)定，不過Taq能耐94度，應(yīng)該問題不大。 引物GC含量太高適當(dāng)?shù)靥岣咦冃詼囟�，一般�?0-92度，樓主可以提高94度。 |
3樓2013-08-16 11:50:11
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