 |
 |
 |
 |
 |
 |
||
 |
 |
 |
 |
 |
| 查看: 2890 | 回復(fù): 13 | ||
| 本帖產(chǎn)生 1 個(gè) BioEPI ，點(diǎn)擊這里進(jìn)行查看 | ||
蒼云寶寶新蟲(chóng) (初入文壇)
|
[求助]
【求助！】有關(guān)超濾離心管的問(wèn)題 已有1人參與
|
|
|
各位大蟲(chóng)好！ 先謝過(guò)大家了！ 最近在做一批蛋白 預(yù)實(shí)驗(yàn)中跑出來(lái)的蛋白條帶都很模糊，就是整條條帶彌散的很?chē)?yán)重（如圖） 感覺(jué)是因?yàn)闃悠分兄?lèi)什么的雜質(zhì)太多了的原因。 所以想能不能用超濾離心管進(jìn)行處理？ 不知道能不能��？~~？~~如果可以該用什么規(guī)格的牌子的呢···該怎么用呢？ 蛋白樣品量很少很少很少···估計(jì)目前也就5ml左右（各位見(jiàn)笑了···）真的是太少了··· 附圖： 8.19-1.jpg 8.22.jpg 8.26-UV.jpg |
回復(fù)此樓» 猜你喜歡
26考研一志愿中國(guó)石油大學(xué)(華東)305分求調(diào)劑
已經(jīng)有4人回復(fù)
-
286求調(diào)劑
已經(jīng)有5人回復(fù)
-
材料與化工（0856）304求 B區(qū) 調(diào)劑
已經(jīng)有3人回復(fù)
-
268求調(diào)劑
已經(jīng)有8人回復(fù)
-
265求調(diào)劑
已經(jīng)有14人回復(fù)
-
350 本科985求調(diào)劑，求老登收留
已經(jīng)有3人回復(fù)
-
【考研調(diào)劑】化學(xué)專(zhuān)業(yè) 281分，一志愿四川大學(xué)，誠(chéng)心求調(diào)劑
已經(jīng)有9人回復(fù)
-
初試 317
已經(jīng)有3人回復(fù)
-
279分求調(diào)劑 一志愿211
已經(jīng)有15人回復(fù)
-
279求調(diào)劑
已經(jīng)有4人回復(fù)
» 本主題相關(guān)價(jià)值貼推薦，對(duì)您同樣有幫助:
- 超濾離心管最大規(guī)格
已經(jīng)有5人回復(fù)
- 純化蛋白時(shí)關(guān)于溶液中咪唑的問(wèn)題
已經(jīng)有7人回復(fù)
- 請(qǐng)問(wèn)有誰(shuí)用過(guò)millipore的超濾管？
已經(jīng)有15人回復(fù)
- 怎么解決超濾離心管對(duì)藥物的吸附
已經(jīng)有5人回復(fù)
- 新人求助：關(guān)于如何去除消化物中的小分子，透析袋or超濾離心管？
已經(jīng)有9人回復(fù)
- 關(guān)于鎳柱純化蛋白
已經(jīng)有10人回復(fù)
- 求助：超濾離心管是一次性的嗎？
已經(jīng)有11人回復(fù)
- 死端超濾和錯(cuò)流超濾的問(wèn)題
已經(jīng)有7人回復(fù)
- 把玻璃離心管套在塑料離心套管上可以實(shí)現(xiàn)高速離心了嗎
已經(jīng)有18人回復(fù)
- 請(qǐng)教用超濾離心管除去DNA中的鹽分。
已經(jīng)有4人回復(fù)
- 有關(guān)Millipore超濾離心管的問(wèn)題，急！
已經(jīng)有14人回復(fù)
- 關(guān)于納米制劑包封率的檢測(cè)
已經(jīng)有9人回復(fù)
- 求助：純化蛋白遇到包涵體了，尿素怎么用？
已經(jīng)有17人回復(fù)
- 救命！最后一關(guān)，proof的幾個(gè)問(wèn)題，急
已經(jīng)有13人回復(fù)
- 求教：關(guān)于超濾離心管的使用問(wèn)題
已經(jīng)有4人回復(fù)
- 超濾離心管
已經(jīng)有6人回復(fù)
- 請(qǐng)問(wèn)大家關(guān)于透析出現(xiàn)的問(wèn)題
已經(jīng)有10人回復(fù)
- 【求助】超濾管的使用
已經(jīng)有13人回復(fù)
- 【求助/交流】關(guān)于millpore超濾離心管
已經(jīng)有8人回復(fù)
- 【求助】超濾離心是怎么回事
已經(jīng)有8人回復(fù)
- 【求助/交流】millipore超濾管超濾
已經(jīng)有8人回復(fù)
- 【求助】小弟，初次使用超濾離心管，有問(wèn)題請(qǐng)教各位大俠，謝謝。。
已經(jīng)有8人回復(fù)
- 【求助/交流】【求助】millipore超濾離心管想重復(fù)使用，請(qǐng)問(wèn)如何清洗和保存？
已經(jīng)有8人回復(fù)
【答案】應(yīng)助回帖
★ ★ ★ ★ ★
silicare: 金幣+5, BioEPI+1 2013-09-04 08:24:41
silicare: 金幣+5, BioEPI+1 2013-09-04 08:24:41
|
用超濾管除去雜蛋白有點(diǎn)不靠譜，不推薦，也很難實(shí)現(xiàn)，去除彌散就更不可能了（也許是我孤陋寡聞。。。） 譬如你的蛋白是40KD的，你用了50KD膜的超濾管，你的蛋白不是都會(huì)通過(guò)膜的，會(huì)有部分通過(guò)膜，部分沒(méi)有通過(guò)的，就算是10KD左右的雜蛋白也不會(huì)都通過(guò)膜的。 超濾管一般用來(lái)做蛋白的濃縮，或者更換緩沖液更多一點(diǎn)。提高蛋白純度很難。一般常用的牌子是millipore的。 明顯你的蛋白修飾比較多，不知道你的表達(dá)系統(tǒng)是什么，糖基化可能性高一點(diǎn)。你可以用糖基化酶進(jìn)行酶切，如果是糖基化的話(huà)，酶切后應(yīng)該會(huì)呈現(xiàn)出單一條帶的。 |
6樓2013-09-02 13:37:09
2樓2013-08-30 10:22:11
蒼云寶寶
新蟲(chóng) (初入文壇)
- 應(yīng)助: 0 (幼兒園)
- 金幣: 84.5
- 帖子: 17
- 在線(xiàn): 2小時(shí)
- 蟲(chóng)號(hào): 2536009
- 注冊(cè): 2013-07-07
- 性別: GG
- 專(zhuān)業(yè): 微生物生理與生物化學(xué)
3樓2013-08-30 20:36:25
4樓2013-09-01 06:44:30
蒼云寶寶
新蟲(chóng) (初入文壇)
- 應(yīng)助: 0 (幼兒園)
- 金幣: 84.5
- 帖子: 17
- 在線(xiàn): 2小時(shí)
- 蟲(chóng)號(hào): 2536009
- 注冊(cè): 2013-07-07
- 性別: GG
- 專(zhuān)業(yè): 微生物生理與生物化學(xué)
5樓2013-09-02 08:47:54
蒼云寶寶
新蟲(chóng) (初入文壇)
- 應(yīng)助: 0 (幼兒園)
- 金幣: 84.5
- 帖子: 17
- 在線(xiàn): 2小時(shí)
- 蟲(chóng)號(hào): 2536009
- 注冊(cè): 2013-07-07
- 性別: GG
- 專(zhuān)業(yè): 微生物生理與生物化學(xué)
|
蒽蒽···那不知你覺(jué)得通過(guò)上面的SDS-PAGE的圖覺(jué)得目前蛋白是出現(xiàn)了什么問(wèn)題導(dǎo)致的這樣的結(jié)果呢？ 我是想不知道能不能通過(guò)超濾管做一個(gè)除雜神馬的···唔··· 做的是蜘蛛吐出來(lái)的消化液的電泳分析（預(yù)測(cè)是蛋白酶之類(lèi)的） 加過(guò)loading buffer 比例1:1（體積比） 上樣前煮沸5min，離心處理10000rpm/min，1min 上樣量在10ul-15ul不等，marker上樣5ul條帶正常。 電泳后染色為25%無(wú)水乙醇，10%冰醋酸，0.1%的考馬斯G-250混合，染色30min，固定液為25%異丙醇+10%冰醋酸混合，固定10min，脫色液為5%的無(wú)水乙醇，10%的冰醋酸混合，直至背景色褪去。 試劑配比： 1、分離膠緩沖液：Tirs 18.17g，SDS 0.4g 溶于水，用3mol/L HCl 調(diào)至pH8.8，加蒸餾水定容至100ml，其中Tris 為1.5mol/L，SDS為0.4% 2、濃縮膠緩沖液：Tris 6.0g，SDS 0.4g 溶于水，用3mol/L HCl 調(diào)至pH6.8，加蒸餾水定容至100ml，其中Tris為0.5mol/L，SDS為 0.4% 3、Arc/Bis：Arc 29.2g，Bis 0.8g 加蒸餾水溶解，定容至100ml，過(guò)濾后裝入棕色試劑瓶，4℃避光保存。 4、10%過(guò)硫酸銨：1g過(guò)硫酸銨溶于10ml去離子水中。 5、1*SDS-樣品緩沖液（10ml）：甘油 1.0g，SDS 0.2g，β-巰基乙醇 0.5ml，溴酚藍(lán) 0.012%（W/V） 加0.25mol/L Tris-HCl（pH 6.8)到10.0ml 6、電極緩沖液：Tris 3.03g，甘氨酸14.4g，SDS 1.0g，溶于蒸餾水（pH 8.3），定容至1000ml。 |
7樓2013-09-02 19:40:05
8樓2013-09-02 20:49:20
蒼云寶寶
新蟲(chóng) (初入文壇)
- 應(yīng)助: 0 (幼兒園)
- 金幣: 84.5
- 帖子: 17
- 在線(xiàn): 2小時(shí)
- 蟲(chóng)號(hào): 2536009
- 注冊(cè): 2013-07-07
- 性別: GG
- 專(zhuān)業(yè): 微生物生理與生物化學(xué)
9樓2013-09-03 20:43:25
10樓2013-09-04 09:30:53
相關(guān)版塊跳轉(zhuǎn)
我要訂閱樓主 蒼云寶寶 的主題更新
| 最具人氣熱帖推薦 [查看全部] | 作者 | 回/看 | 最后發(fā)表 | |
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 初試 317 +3 | 半拉月丙 2026-03-20 | 3/150 |
|
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 299求調(diào)劑 +4 | shxchem 2026-03-20 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 085601調(diào)劑 358分 +3 | zzzzggh 2026-03-20 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 297求調(diào)劑 +9 | 戲精丹丹丹 2026-03-17 | 9/450 |
|
|
|
[考研] 材料專(zhuān)業(yè)求調(diào)劑 +6 | hanamiko 2026-03-18 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 296求調(diào)劑 +6 | www_q 2026-03-18 | 10/500 |
|
|
|
[考研] 304求調(diào)劑 +7 | 司空. 2026-03-18 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 一志愿北京化工大學(xué)0703化學(xué)318分，有科研經(jīng)歷，求調(diào)劑 +4 | 一瓶苯甲酸 2026-03-14 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 319求調(diào)劑 +3 | 小力氣珂珂 2026-03-20 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 一志愿吉林大學(xué)材料學(xué)碩321求調(diào)劑 +11 | Ymlll 2026-03-18 | 15/750 |
|
|
|
[考研] 一志愿南理工085701環(huán)境302求調(diào)劑院校 +3 | 葵梓衛(wèi)隊(duì) 2026-03-20 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 材料與化工求調(diào)劑 +7 | 為學(xué)666 2026-03-16 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 一志愿福大288有機(jī)化學(xué)，求調(diào)劑 +3 | 小木蟲(chóng)200408204 2026-03-18 | 3/150 |
|
|
|
[考研]
 0854，計(jì)算機(jī)類(lèi)招收調(diào)劑
+3
|
胡辣湯放糖 2026-03-15 | 6/300 |
|
|
|
[碩博家園] 湖北工業(yè)大學(xué) 生命科學(xué)與健康學(xué)院-課題組招收2026級(jí)食品/生物方向碩士 +3 | 1喜春8 2026-03-17 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 302求調(diào)劑 +4 | 小賈同學(xué)123 2026-03-15 | 8/400 |
|
|
|
[考研] [導(dǎo)師推薦]西南科技大學(xué)國(guó)防/材料導(dǎo)師推薦 +3 | 尖角小荷 2026-03-16 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 326求調(diào)劑 +4 | 諾貝爾化學(xué)獎(jiǎng)覬?/a> 2026-03-15 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 中科院材料273求調(diào)劑 +4 | yzydy 2026-03-15 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 0856求調(diào)劑 +3 | 劉夢(mèng)微 2026-03-15 | 3/150 |
|