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蒼云寶寶新蟲 (初入文壇)
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[求助]
【求助！】有關(guān)超濾離心管的問題 已有1人參與
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各位大蟲好！ 先謝過大家了！ 最近在做一批蛋白 預(yù)實驗中跑出來的蛋白條帶都很模糊，就是整條條帶彌散的很嚴(yán)重（如圖） 感覺是因為樣品中脂類什么的雜質(zhì)太多了的原因。 所以想能不能用超濾離心管進(jìn)行處理？ 不知道能不能��？~~？~~如果可以該用什么規(guī)格的牌子的呢···該怎么用呢？ 蛋白樣品量很少很少很少···估計目前也就5ml左右（各位見笑了···）真的是太少了··· 附圖： 8.19-1.jpg 8.22.jpg 8.26-UV.jpg |
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蒼云寶寶
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蒽蒽···那不知你覺得通過上面的SDS-PAGE的圖覺得目前蛋白是出現(xiàn)了什么問題導(dǎo)致的這樣的結(jié)果呢？ 我是想不知道能不能通過超濾管做一個除雜神馬的···唔··· 做的是蜘蛛吐出來的消化液的電泳分析（預(yù)測是蛋白酶之類的） 加過loading buffer 比例1:1（體積比） 上樣前煮沸5min，離心處理10000rpm/min，1min 上樣量在10ul-15ul不等，marker上樣5ul條帶正常。 電泳后染色為25%無水乙醇，10%冰醋酸，0.1%的考馬斯G-250混合，染色30min，固定液為25%異丙醇+10%冰醋酸混合，固定10min，脫色液為5%的無水乙醇，10%的冰醋酸混合，直至背景色褪去。 試劑配比： 1、分離膠緩沖液：Tirs 18.17g，SDS 0.4g 溶于水，用3mol/L HCl 調(diào)至pH8.8，加蒸餾水定容至100ml，其中Tris 為1.5mol/L，SDS為0.4% 2、濃縮膠緩沖液：Tris 6.0g，SDS 0.4g 溶于水，用3mol/L HCl 調(diào)至pH6.8，加蒸餾水定容至100ml，其中Tris為0.5mol/L，SDS為 0.4% 3、Arc/Bis：Arc 29.2g，Bis 0.8g 加蒸餾水溶解，定容至100ml，過濾后裝入棕色試劑瓶，4℃避光保存。 4、10%過硫酸銨：1g過硫酸銨溶于10ml去離子水中。 5、1*SDS-樣品緩沖液（10ml）：甘油 1.0g，SDS 0.2g，β-巰基乙醇 0.5ml，溴酚藍(lán) 0.012%（W/V） 加0.25mol/L Tris-HCl（pH 6.8)到10.0ml 6、電極緩沖液：Tris 3.03g，甘氨酸14.4g，SDS 1.0g，溶于蒸餾水（pH 8.3），定容至1000ml。 |
7樓2013-09-02 19:40:05
2樓2013-08-30 10:22:11
蒼云寶寶
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3樓2013-08-30 20:36:25
4樓2013-09-01 06:44:30
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