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lily0423銀蟲 (小有名氣)
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[求助]
PCR產(chǎn)物彌散 擴不出來 怎么回事啊 求教 謝謝
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這是提取的土壤DNA進行PCR，是氨氧化細菌的功能基因 擴增出來為什么是一片白？右側(cè)4個隱約可以看到目的基因 但是很淡！我的是 退火57度 30s，延伸 72度45秒 新圖片.jpg |
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【答案】應(yīng)助回帖
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gyesang: 金幣+2, 鼓勵回帖交流！ 2013-09-12 09:57:46
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1.在引物沒有試驗過，PCR條件沒確定的情況下，建議用梯度PCR儀確定退火溫度。 2.有陽性模板的情況下設(shè)立陽性對照。（成功的pCR結(jié)果，稀釋1000倍就可以）建議每次都設(shè)立。 3.模板的問題。（和樣品有關(guān)，有一定的可能） 4.引物設(shè)計和模板不匹配。因為引物可能是簡并引物，特異性較差�；蚍蛛x的菌株同標(biāo)準菌株的序列有所差異。 5.極端的解決辦法是膠回收PCR產(chǎn)物條帶。以其為模板再擴增。然后測序。（實在沒辦法時，可以嘗試） 或在PCR目的片段內(nèi)再設(shè)計一段截短的片段，以PCR結(jié)果為模板做二次PCR |
2樓2013-09-11 08:29:30
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4樓2013-09-12 09:01:55
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6樓2013-09-12 13:31:43
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