 |
 |
 |
 |
 |
 |
||
 |
 |
 |
 |
 |
| 5 | 1/1 | 返回列表 |
| 查看: 845 | 回復(fù): 3 | ||
| 當前只顯示滿足指定條件的回帖，點擊這里查看本話題的所有回帖 | ||
[求助]
求提取水稻基因組的經(jīng)驗
|
||
| 最近在提取水稻的基因組，但是老是感覺提取的不好（我用RNAase處理了，RNA是沒有了，但是就是感覺提取的不怎么好�。�，因為要做甲基化，對基因組的純度要求比較高！請問誰可以給我一些建議，最好做是自己提取了比較好的植物基因組，給點經(jīng)驗！本人將不勝感激！ |
回復(fù)此樓» 猜你喜歡
0856求調(diào)劑
已經(jīng)有13人回復(fù)
-
0703化學(xué)
已經(jīng)有11人回復(fù)
-
329求調(diào)劑
已經(jīng)有7人回復(fù)
-
321求調(diào)劑
已經(jīng)有8人回復(fù)
-
0856材料化工調(diào)劑 總分330
已經(jīng)有12人回復(fù)
-
309求調(diào)劑
已經(jīng)有3人回復(fù)
-
070300化學(xué)354求調(diào)劑
已經(jīng)有4人回復(fù)
-
330分求調(diào)劑
已經(jīng)有3人回復(fù)
-
299求調(diào)劑
已經(jīng)有8人回復(fù)
-
一志愿北京理工大學(xué)本科211材料工程294求調(diào)劑
已經(jīng)有6人回復(fù)
» 本主題相關(guān)價值貼推薦，對您同樣有幫助:
- 水體細菌基因組總DNA的提取
已經(jīng)有6人回復(fù)
- 黃粉蟲基因組DNA提取方法咨詢
已經(jīng)有7人回復(fù)
- 關(guān)于DNase1 去除提取的RNA中基因組DNA的問題
已經(jīng)有12人回復(fù)
- 提取細菌基因組DNA
已經(jīng)有9人回復(fù)
- 用CTAB法提取細菌基因組DNA時，為何離心效果不好
已經(jīng)有4人回復(fù)
- 用于RNA提取的CTAB溶液的配置
已經(jīng)有7人回復(fù)
- 細菌基因組DNA提取 交流
已經(jīng)有18人回復(fù)
- 基因組DNA提取問題
已經(jīng)有32人回復(fù)
- 真菌基因組DAN提取圖片，求高人指點
已經(jīng)有20人回復(fù)
- 求助：大腸桿菌基因組的提取
已經(jīng)有6人回復(fù)
- 求助水稻葉片DNA的提取方法
已經(jīng)有10人回復(fù)
- 基因組提取
已經(jīng)有7人回復(fù)
- 【求助/交流】關(guān)于提取基因組DNA過程中遇到的難題
已經(jīng)有10人回復(fù)
- 【求助/交流】提取細菌基因組DNA的試劑盒
已經(jīng)有8人回復(fù)
- 【求助】尋水稻種植方法和注意事項及水稻水培的營養(yǎng)液表
已經(jīng)有15人回復(fù)
- 【求助/交流】提取基因組DNA后瓊脂糖凝膠電泳顯示拖尾
已經(jīng)有12人回復(fù)
- 【求助/交流】細胞基因組的提取
已經(jīng)有10人回復(fù)
- 【求助/交流】大腸桿菌基因組提取
已經(jīng)有4人回復(fù)
- 【求助/交流】細菌基因組DNA的提取法（CTAB/NaCl 法）,提取的DNA是否為細菌總DNA? 非?/a>
已經(jīng)有11人回復(fù)
- 【求助/交流】提取的植物基因組DNA電泳圖，疑問？？？
已經(jīng)有17人回復(fù)
3樓2013-10-26 22:05:35
文庫構(gòu)建 
鐵蟲 (小有名氣)
- 應(yīng)助: 4 (幼兒園)
- 金幣: 644.2
- 帖子: 60
- 在線: 11.5小時
- 蟲號: 2722286
- 注冊: 2013-10-14
- 專業(yè): 發(fā)育生物學(xué)
【答案】應(yīng)助回帖
|
百博明創(chuàng)實驗室以水稻幼苗(禾本科)、李(蘋果)葉子、動物肌肉組織和大腸桿菌培養(yǎng)物為材料,學(xué)習基因組DNA提取的一般方法。 1. 從植物組織提取基因組DNA 一、材料 水稻幼苗或其它禾本科植物，李（蘋果）幼嫩葉子。 二、設(shè)備 移液器，冷凍高速離心機，臺式高速離心機，水浴鍋，陶瓷研缽，50ml離心管（有蓋）及5ml和1.5ml離心管，彎成鉤狀的小玻棒。 三、試劑 1、提取緩沖液Ⅰ：100mmol/L Tris·Cl, pH8.0, 20mmol/L EDTA, 500mmol/L NaCl, 1.5% SDS。 2、提取緩沖液Ⅱ：18.6g葡萄糖，6.9g二乙基二硫代碳酸鈉，6.0gPVP，240ul巰基乙醇，加水至300ml。 3、80:4:16/氯仿:戊醇:乙醇 4、 RnaseA母液：配方見第一章。 5、其它試劑：液氮、異丙醇、TE緩沖液，無水乙醇、70%乙醇、3mol/L NaAc。 四、操作步驟： （一）水稻幼苗或其它禾木科植物基因組DNA提取 1. 在50ml離心管中加入20ml提取緩沖液Ⅰ, 60℃水浴預(yù)熱。 2. 水稻幼苗或葉子5-10g, 剪碎, 在研缽中加液氮磨成粉狀后立即倒入預(yù)熱的離心管中, 劇烈搖動混勻, 60℃水浴保溫30-60分鐘(時間長,DNA產(chǎn)量高), 不時搖動。 3. 加入20ml氯仿/戊醇/乙醇溶液, 顛倒混勻(需帶手套, 防止損傷皮膚)，室溫下靜置5-10分鐘, 使水相和有機相分層(必要時可重新混勻)。 4. 室溫下5000rpm離心5分鐘。 5. 仔細移取上清液至另一50ml離心管,加入1倍體積異丙醇,混勻,室溫下放置片刻即出現(xiàn)絮狀DNA沉淀。 6. 在1.5ml eppendorf中加入1ml TE。用鉤狀玻璃棒撈出DNA絮團,在干凈吸水紙上吸干,轉(zhuǎn)入含TE的離心管中,DNA很快溶解于TE。 7. 如DNA不形成絮狀沉淀,則可用5000rpm離心5分鐘, 再將沉淀移入TE管中。這樣收集的沉淀,往往難溶解于TE,可在60℃水浴放置15分鐘以上，以幫助溶解。 8. 將DNA溶液3000rpm離心5分鐘, 上清液倒入干凈的5ml離心管。 9. 加入5μl RNaseA(10μg/μl), 37℃ 10分鐘, 除去RNA(RNA對DNA的操作、分析一般無影響，可省略該步驟）。 10. 加入1/10體積的3mol/L NaAc及2×體積的冰乙醇,混勻,-20℃放置20分鐘左右,DNA形成絮狀沉淀。 11. 用玻棒撈出DNA沉淀,70%乙醇漂洗,再在干凈吸水紙上吸干。 12. 將DNA重溶解于1ml TE, -20貯存。 13. 取2μl DNA樣品在0.7% Agarose膠上電泳, 檢測DNA的分子大小。同時取15μl稀釋20倍, 測定OD260/OD280, 檢測DNA含量及質(zhì)量。 [注意] 5g樣品可保證獲得500μg DNA, 足供RFLP、PCR等分析之用。 �。ǘ�. 從李(蘋果)葉子提取基因組DNA 1. 取3-5克嫩葉, 液氮磨成粉狀。 2. 加入提取緩沖液Ⅱ10ml, 再研磨至溶漿狀。10000rpm, 10min。 3. 去上清液,沉淀加提取液Ⅰ20ml, 混勻。65℃, 30-60min, 常搖動。 4. 同本節(jié)（一）中步驟3-13操作。 信息來源：BAC文庫構(gòu)建篩選專家 |
2樓2013-10-16 10:12:34
文庫構(gòu)建
鐵蟲 (小有名氣)
- 應(yīng)助: 4 (幼兒園)
- 金幣: 644.2
- 帖子: 60
- 在線: 11.5小時
- 蟲號: 2722286
- 注冊: 2013-10-14
- 專業(yè): 發(fā)育生物學(xué)
|
毫無疑問，優(yōu)質(zhì)的基因組DNA對于基因組文庫構(gòu)建是至關(guān)重要的。研究者需要查閱文獻，通過經(jīng)驗來選擇合適的基因組DNA分離方法，在分離過程中保證DNA不被過度剪切或降解，同時也要盡量保證DNA的純度。 二、處理基因組DNA 根據(jù)研究目的，研究者需要選擇合適的載體。不同的載體對基因組DNA的長度有不同的要求，研究者必須選擇合適長度的基因組DNA來構(gòu)建基因組文庫。 構(gòu)建黏�；蚪MDNA文庫，研究者需要將基因組DNA用注射器抽打來隨機剪切DNA；接著用末端修復(fù)酶修復(fù)DNA，可以提高DNA連接入載體的效率；然后通過脈沖場電泳或者普通電泳來找到40kb左右的DNA片段，隨后使用百博明創(chuàng)的膠回收試劑盒回收DNA。構(gòu)建BAC基因組DNA文庫，研究者需要將基因組DNA用限制性內(nèi)切酶（常用EcoR I、BamH I或者Hind III）來消化基因組DNA，然后通過脈沖場電泳找到合適長度的DNA片段（比如100kb-150kb），隨后透析回收DNA。 需要注意： （1）電泳時，要選用合適的DNA Ladder，以保證電泳后可以準確定位所需分子量的DNA。用百博明創(chuàng)試劑盒構(gòu)建黏粒文庫時，就可以直接采用文庫試劑盒內(nèi)的Control Insert DNA來做marker，既方便又準確。 （2）電泳以后，應(yīng)該避免用紫外光照射目標DNA，紫外光照射DNA會顯著降低克隆效率。解決方法：把marker所在的部分凝膠切下，在紫外燈下做好記號，然后以此為參考定位所需的片段。 （3）回收DNA的時候，應(yīng)該要避免過度離心，以防止DNA被剪切，降低文庫質(zhì)量。 來源:http://blog.sina.com.cn/s/blog_e4e0c7460101de44.html |
4樓2013-10-31 11:02:01
| 最具人氣熱帖推薦 [查看全部] | 作者 | 回/看 | 最后發(fā)表 | |
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 一志愿北京理工大學(xué)本科211材料工程294求調(diào)劑 +6 | mikasa的圍巾 2026-03-28 | 6/300 |
|
|---|---|---|---|---|
|
|
[考研] 348求調(diào)劑 +3 | 小懶蟲不懶了 2026-03-28 | 3/150 |
|
|
[考研] 317分 一志愿南理工材料工程 本科湖工大 求調(diào)劑 +7 | 芋泥小鈴鐺 2026-03-28 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 化學(xué)0703 調(diào)劑 306分 一志愿211 +4 | 26要上岸 2026-03-28 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 322求調(diào)劑 +5 | 舊吢 2026-03-24 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 286求調(diào)劑 +12 | PolarBear11 2026-03-26 | 12/600 |
|
|
|
[考研] 291求調(diào)劑 +15 | hhhhxn.. 2026-03-23 | 21/1050 |
|
|
|
[考研] 291求調(diào)劑 +6 | HanBeiNingZC 2026-03-24 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 295求調(diào)劑 +5 | 1428151015 2026-03-27 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 291求調(diào)劑 +7 | 孅華 2026-03-22 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 330一志愿中國海洋大學(xué) 化學(xué)工程 085602 有讀博意愿 求調(diào)劑 +3 | wywy.. 2026-03-27 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 085600，材料與化工321分，求調(diào)劑 +9 | 大饞小子 2026-03-27 | 9/450 |
|
|
|
[考研] 298調(diào)劑 +3 | jiyingjie123 2026-03-27 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 0703化學(xué)338求調(diào)劑！ +6 | Zuhui0306 2026-03-26 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 求調(diào)劑 +8 | Auroracx 2026-03-22 | 8/400 |
|
|
|
[考研] 一志愿 南京郵電大學(xué) 288分 材料考研 求調(diào)劑 +3 | jl0720 2026-03-26 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 26考研-291分-廈門大學(xué)（085601）-柔性電子學(xué)院材料工程專業(yè)求調(diào)劑 +3 | min3 2026-03-24 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 0854人工智能方向招收調(diào)劑 +4 | 章小魚567 2026-03-24 | 4/200 |
|
|
|
[考研] B區(qū)考研調(diào)劑 +4 | yqdszhdap－ 2026-03-22 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 328求調(diào)劑 +4 | LHHL66 2026-03-23 | 4/200 |
|