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hongcaier鐵蟲(chóng) (初入文壇)
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[求助]
RIPA提取總蛋白濃度低的原因
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求各位大蝦幫忙 我用6cm培養(yǎng)皿細(xì)胞轉(zhuǎn)染后提總蛋白，細(xì)胞長(zhǎng)得很滿。 方法是：用PBS洗細(xì)胞三次后，用RIPA，每皿加100ul，100:1加pmsf cocktail。冰上裂解細(xì)胞。冰上放置20min后用細(xì)胞刮把細(xì)胞刮下，吸到EP管中。放在冰上靜置25min。4℃離心12000g 10min，取上清。測(cè)濃度，濃度很低。 求問(wèn)原因？ |
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xiangyu9356
至尊木蟲(chóng) (小有名氣)
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【答案】應(yīng)助回帖
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hongcaier: 金幣+5, ★有幫助 2013-09-23 12:49:49
| 如果蛋白濃度很低的話，建議檢查蛋白酶抑制劑是否失效。如果以前沒(méi)有加蛋白酶抑制劑的習(xí)慣話建議配制裂解液時(shí)添加。另：加入裂解液裂解細(xì)胞時(shí)不用在冰上放置太長(zhǎng)時(shí)間，我一般是加入裂解液后1-3min就開(kāi)始刮；吸到EP管中我一般是超聲破碎，減少放置時(shí)間。祝好！ |
2樓2013-09-17 13:02:34
hongcaier
鐵蟲(chóng) (初入文壇)
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