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北京石油化工學(xué)院2026年研究生招生接收調(diào)劑公告

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xulong712711

銅蟲 (初入文壇)

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[求助] 考馬斯亮藍(lán)法具體步驟

考馬斯亮藍(lán)法具體步驟的說明書，英文也可以

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1樓 2013-09-22 10:20:54

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lifming

鐵蟲 (小有名氣)

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【答案】應(yīng)助回帖

★ ★ ★
gyesang: 金幣+3, 鼓勵回帖交流！ 2013-10-02 00:27:27

Bradford法測定蛋白質(zhì)濃度
1.目的：
練習(xí)標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作，比較不同pH值的蛋白質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)溶液對測定的影響。
2.試劑：
①顯色劑：取100mg考馬斯亮藍(lán)G-250溶于50ml 95%乙醇，加入100ml 85%（w/v）磷酸，將溶液用水稀釋到1000ml。
②BSA標(biāo)準(zhǔn)溶液（1000µg/ml），分別用0.01N鹽酸，去離子水，0.01N NaOH溶液配制，4℃冰箱放置可保存一周。
3.設(shè)備與儀器：
微量移液器：一支用于專吸BSA；一支用于專吸dH2O
島津UV-265紫外可見光分光光度計
4.操作程序：
試管號 1 2 3 4 5 6
BSA（µl） 0 10 20 40 70 100
去離子水（µl） 100 90 80 60 30 0
顯色劑（ml） 5 5 5 5 5 5
加顯色劑混勻，靜止2min后測定OD595，建立標(biāo)準(zhǔn)曲線
注：①顯色液中G-250，出現(xiàn)沉淀不能用。
②定容BSA標(biāo)準(zhǔn)液時，混合次數(shù)，以保證混勻。
樣品的加入同BSA的加入。如果OD太高，減少加入量

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