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jonew木蟲 (正式寫手)
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[求助]
PCR結(jié)果分析
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各路，請(qǐng)問(wèn)哪些亮亮的拖帶是怎么回事？我下一步該怎么改進(jìn)？我的目的條帶在2500bp ，模板是cDNA。急急急！�。�！ 望各路大俠指點(diǎn)。。。 2013.9.26.pcr-2.jpg |
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8樓2013-09-30 17:17:07
【答案】應(yīng)助回帖
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jonew: 金幣+4 2013-10-02 15:46:13
jonew: 金幣+4 2013-10-02 15:46:13
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拖尾條帶是非特異性擴(kuò)增的產(chǎn)物 推薦解決措施： 重新設(shè)計(jì)退火溫度相對(duì)較低一些的引物 采用熱啟動(dòng)的Taq酶，一些國(guó)產(chǎn)商業(yè)化的熱啟動(dòng)酶也都不貴的，便宜好用（國(guó)產(chǎn)的比如Transgen的普通熱啟動(dòng)酶250單位也才￥180，跟Takara、Thermo比起來(lái)價(jià)錢簡(jiǎn)直弱爆了。） 采用梯度退火溫度PCR，退火溫度從現(xiàn)在的退火溫度開(kāi)始依次提高，每次一度，直到65度左右（注意，我指的不是touch down） 縮短退火時(shí)間 降低鎂離子、減少Taq酶的量（這個(gè)說(shuō)實(shí)話真沒(méi)覺(jué)得有啥必要了） 以這個(gè)產(chǎn)物為模板再進(jìn)行PCR的話也可以一試，但是按照我們的經(jīng)驗(yàn)基本不會(huì)有結(jié)果的 |
9樓2013-09-30 23:26:22
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