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HeLa細胞傳代后90% 死亡，求解
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本人菜鳥，才開始學養(yǎng)細胞。 替別人傳 細胞，結果HeLa細胞狀態(tài)好，長的太快，本是第二天下午傳的，結果沒時間，第三天中午傳的。因為細胞長的很滿，不過也有很多死細胞，就一個大瓶傳了一個中瓶，兩個大瓶。鏡檢，三個瓶子中細胞濃度很大。根據(jù)以前的經(jīng)驗，長一天絕對很滿。結果第四天早上，也就是今天早晨看的時候，90%的細胞飄起來了，只有10%細胞貼壁生長，而且狀態(tài)不好。 這次的培養(yǎng)基是新配的，初步認為可能是新配置的培養(yǎng)基沒有混合均勻，因為我加入FBS和雙抗之后，只是左右晃動幾下培養(yǎng)基，10min之后開始用這個培養(yǎng)基（配置培養(yǎng)基后才開始消化細胞），不知道是不是這個原因。 雙抗是找別人借的，人家說濃度是100 X 的。DMEM是新的，F(xiàn)BS是用過的，冰箱放置了約3天吧。 其次是前天傳了一批自己養(yǎng)的HeLa細胞，培養(yǎng)基是以前的，昨天看還是可以的，死細胞不多，只是貼壁細胞不多，但是今天早上看的時候，也是很多死細胞，狀態(tài)不好，不知道什么原因。 不知道是不是污染導致這些細胞離我而去？求大俠們解答。 |
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細胞培養(yǎng)操作是最容易的，要了解細胞的生長周期以及該細胞相關知識是比較難得。出現(xiàn)樓主這種現(xiàn)象原因很多，主要可從三方面考慮：第一，養(yǎng)細胞就像養(yǎng)小孩一樣，必須細心、耐心。舉例，80歲的老人他是沒有生育能力的，細胞只有在年輕的時候（增殖期）才能繁育出好的后代，細胞本應該在最合適的時機進行傳代工作，但是您錯過了這個機會，造成細胞大面積死亡；第二，新鮮配制的培養(yǎng)液各種成分不是自己制備，很多不可控制的因素可能是一種原因；第三，整體培養(yǎng)環(huán)境出現(xiàn)問題，譬如細胞是在5-6%的二氧化碳環(huán)境下生長，細胞瓶蓋是否關的太嚴實，造成培養(yǎng)液不能充分的接觸二氧化碳。 本人認為第一條是造成您細胞大面積死亡的主要原因。 |
13樓2013-10-11 18:24:00
arystal
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2樓2013-09-29 13:46:27
3樓2013-09-29 16:22:30
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4樓2013-09-29 17:01:58
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