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lovecindy126新蟲 (初入文壇)
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[求助]
求助： 氨基酸OPA 柱前衍生
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各位大神好： 我最近在用agilent AAA 柱子 （專用于氨基酸的檢測(cè)和分離）試圖做method validation, 但是發(fā)現(xiàn)數(shù)據(jù)誤差較大 RSD =10% （即用同一個(gè)樣品進(jìn)樣三次），百思不得其解所以跪求大神提點(diǎn)， 下邊是我的實(shí)驗(yàn)條件和所用儀器 HPLC: Agilent 1100, autosampler 1313A MOBILE PHASE A: 40mM Na2HPO4, PH= 7.8 MOBLIE PHASE B: MeOH: ACN:H2O (45:45：10） OPA reagent (sigma aldrich) : 鄰苯二甲醛 Borate buffer: 0.2 M, pH = 10.2 HPLC condition: 61%A :39% B isocrastic for 7 min Temp: 40 C Flow rate: 1.0ml/min uv: 338 bw 10 262 bw 16 The autosampler program: Draw 10.0 ul from borate buffer Draw 5.0 ul amino acid, 200ul/min speed Mix 15ul in air, 200ul/min speed, 5 times Wait for 0.5 min Draw 0.0 ul from ACN:H20 (50:50), 200ul/min speed, Draw 10.0 ul OPA, 200ul/min speed Mix 25ul in air, 200ul/min speed, 6 times Inject Wait for 0.1 min Needle wash in ACN:H2O(50:50) Valve pass 氨基酸和OPA的濃度比大約是1:10， 理論上我應(yīng)該加了過量的OPA 所以我現(xiàn)在的問題是想知道問題到底出在哪里， 是我的program 有問題嗎， 還是我的氨基酸和OPA的用量比例不對(duì)， 抑或是OPA 試劑有問題 跪謝�。� |
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lovecindy126
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