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jerryzyy金蟲(chóng) (小有名氣)
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[求助]
梯度熒光定量的程序如何設(shè)置
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| 我正在做熒光定量，做的是土壤微生物的絕對(duì)定量，用普通的PCR擴(kuò)增用的是梯度PCR，即退火溫度從67-57度，每個(gè)循環(huán)降低0.5度，20個(gè)循環(huán)后，退火57，12個(gè)循環(huán)，我想知道，做熒光定量的時(shí)候我這個(gè)程序應(yīng)該怎么設(shè)置，主要是后面溶解曲線的時(shí)候如果不是梯度PCR的話，直接從65升到95，每循環(huán)升5度，來(lái)做溶解曲線，而我現(xiàn)在如果是梯度PCR的話，這個(gè)溶解曲線這塊應(yīng)該怎么設(shè)置，請(qǐng)高手指點(diǎn)！非常感謝！ |
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9樓2013-10-15 20:43:21
cicelyzh
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【答案】應(yīng)助回帖
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
| 熔解曲線就是一般方法設(shè)置。做熔解曲線是在反應(yīng)完全進(jìn)行完畢后通過(guò)逐步升高溫度來(lái)看產(chǎn)物降解的過(guò)程，通過(guò)檢測(cè)產(chǎn)物在熔解曲線峰的情況來(lái)判斷產(chǎn)物是否單一。所以，無(wú)論你前面做了怎樣的PCR，熔解曲線的做法是基本一樣的。設(shè)置從Tm+5開(kāi)始到95°C。通常的產(chǎn)物不會(huì)在70°C以下熔解，你的情況可以從67°C設(shè)置起始熔解曲線的溫度。 |
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jerryzyy2樓2013-10-04 05:16:18
3樓2013-10-04 10:41:09
jerryzyy
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4樓2013-10-04 20:33:25
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